[发明专利]一种抗人神经丝轻链(NEFL)的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种抗神经丝轻链(NEFL)的单克隆抗体,所述的抗体是由保藏号为CGMCC No.18189的杂交瘤细胞株OTI11F6分泌产生。所述抗体的免疫原是原核细胞表达的NEFL 1‑360aa多肽。所述抗体的轻链(VL)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,其重链(VH)的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。所述抗体的VL包括3个抗原决定簇：CDR1、CDR2和CDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID No.3‑5所示，所述抗体的VH区域包括3个抗原决定簇：CDR1、CDR2和CDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID No.6‑8所示。所述抗体OTI11F6可应用于人NEFL的各种免疫检测试剂盒的制备，包括双抗体夹心酶联免疫试剂盒或化学发光法试剂盒的制备，为临床上对脑损伤与脑慢性病变提供辅助诊断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种抗人NEFL的单克隆抗体及其在免疫检测方面的应用。

背景技术

神经中间丝或称神经纤维丝包括3个亚基：神经丝轻链(neurofilament lightpolypeptide,NEFL)、神经丝中链(NEFM)和神经丝重链(NEFH)，相对分子质量分别为68,000、160,000和212,000。NEFL是唯一可以自我组装的亚单位，NEFL在体外可自我组装成同型多聚体的10nm的纤维，当NEFL亚单位缺少时，神经丝中链多肽和神经丝重链多肽亚单位不能组装成功能性神经丝蛋白，因而NEFL被认为是最重要的神经纤维丝。

NEFL是组成神经细胞骨架的关键成分，并与对神经细胞塑形至关重要的多个蛋白靶点有相互联系，在维持神经细胞形态及使有髓鞘的轴突再生方面起关键性作用。近年来发现，NEFL与神经系统相关疾病的关系密切，是阿尔茨海默病、脑震荡、帕金森氏综合征等脑部病变的血液生物标志物，也发现NEFL可能与神经系统以外肿瘤的发生、发展密切相关，如乳腺癌、肺癌、头颈部肿瘤等。因此，采用具有高灵敏度和高特异性的检测NEFL方法在相关人群中进行筛查，对相关疾病的诊断具有重大意义。

NEFL共543aa，含2个糖基化位点，2-543aa为主链。其中2-92aa为链的头部，是抗体结合区；93-396aa是链体，其特别的质量和高电荷密度有别于其他神经丝蛋白但与其他神经丝的同源性非常高；397-543aa是链的尾部，影响链的空间结构。NEFL的含量在脑脊液中远高于血液，两者相差近10倍，因此，寻找高特异性和高敏感性的抗NEFL抗体是建立检测血液NEFL方法的关键。检索中国、美国、EPO、WIPO等专利网站，利用neurofilament light或NEFL+monoclonal antibody或antibody作为关键词，有关与NEFL具有高亲和力和特异性结合的单克隆抗体的专利没有查到，有关检测利用抗NEFL鼠单克隆抗体OTI11F6制备免疫检测试剂盒也未查到；利用neurofilament light或NEFL+monoclonal antibody或antibody作为关键词，在pubmed仅查到一篇文献即Anovel duplication/insertion mutationofNEFL in a patient with Charcot-Marie-Tooth disease，相关内容与本发明无关。查询中国市场监督管理总局(原国家药品监督管理局)网站，还没有与NEFL相关的检测试剂注册。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性好、亲和力高的抗NEFL单克隆抗体及其在双抗体夹心酶联免疫法或板式化学发光法制备的免疫检测试剂盒中的应用,为与NEFL相关的疾病提供辅助诊断，也为下一步工程抗体的制备提供基础。

所述的抗NEFL单克隆抗体OTI11F6，是由保藏号为:CGMCC No.18189的杂交瘤细胞株OTI11F6分泌产生。

所述的杂交瘤细胞株OTI11F6是以原核细胞表达的NEFL 1-360aa为免疫源,通过免疫注射小鼠,取免疫小鼠脾脏制备悬液,并使之与骨髓瘤细胞进行细胞融合获得。