[发明专利]墨西哥湾扇贝微卫星标记的特异引物及其构建方法和应用

说明书

墨西哥湾扇贝微卫星标记的特异引物及其构建方法和应用，针对现阶段培育墨西哥湾扇贝存在的问题，运用磁珠富集法筛选墨西哥湾扇贝微卫星分子标记，并利用微卫星标记对墨西哥湾扇贝的遗传多样性进行评价；由测序得到的微卫星序列设计并获得了20对能够在墨西哥湾扇贝基因组有效扩增且具有多态性的微卫星引物。本发明有助于了解墨西哥湾扇贝的遗传特征，为墨西哥湾扇贝种质资源改良提供相关的遗传背景资料和理论依据。

技术领域

本发明属于分子生物学DNA标记技术领域，尤其涉及墨西哥湾扇贝微卫星标记的特异引物及其构建方法和应用。

背景技术

墨西哥湾扇贝原产于美国，主要分布在美国东部大西洋沿岸新泽西州至佛罗里达州之间的海域，由于其双壳比海湾扇贝更加膨凸，出柱率高于海湾扇贝。与海湾扇贝相比，墨西哥湾扇贝具有出肉率高、出柱率高、生长快、适合在中国南方海域养殖等特点。尤其是养殖周期较短，能够避开台风以减少损失，受到业界青睐。至2014年，其养殖面积已超过6600hm²，成为北部湾海域贝类养殖的重要产业。但是墨西哥湾扇贝引种至今已近30年，随着养殖世代的增加，加上近交和瓶颈效应，该品种出现了抗逆性降低、生长速度减慢、个体小型化、死亡率升高等一系列问题，养殖效益严重下滑。

微卫星DNA(Microsatellite DNA)，又称简单重复序列(Simple SequenceRepeats，SSR)，是目前应用最为广泛的分子标记之一，其核心重复序列一般为1-6个碱基，如(CA)_n、(GT)_n、 (CAG)_n、(AGCT)_n等，首尾相连组成的串联重复序列，长度一般在100bp以内。微卫星标记在家系建立、减少或避免近交衰退，个体识别和亲缘关系鉴定等工作中具有重要作用。

申请号为201410750857.5中国专利，其公开了14个管角螺微卫星位点及其引物，所获引物的扩增结果具有高度的多态性和稳定性，用于管角螺的种群遗传多样性检测、个体鉴定或分子辅助育种方法；但是没有给出具体的应用方法和应用结果分析。

现阶段，尚无一种对墨西哥扇贝的系统性遗传特征分析方法，为解决该品种容易出现的抗逆性降低、生长速度减慢、个体小型化、死亡率升高等一系列问题，养殖效益严重下滑，因此对墨西哥湾扇贝进行种质资源改良已经迫在眉睫，为进一步了解墨西哥湾扇贝养殖群体的遗传特征，为墨西哥湾扇贝种质资源改良提供相关的遗传背景资料和理论依据，对墨西哥湾扇贝进行微卫星标记、遗传信息的有效分析十分迫切。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供墨西哥湾扇贝微卫星标记的特异引物及其构建方法和应用，针对墨西哥湾扇贝出现的养殖问题，开发筛选出微卫星分子标记，并利用微卫星标记分析墨西哥湾扇贝的遗传多样性，为了解墨西哥湾扇贝养殖群体的遗传特征、墨西哥湾扇贝种质资源改良提供相关的遗传背景资料和理论依据。

为此本发明采用以下技术方案：

一种墨西哥湾扇贝微卫星标记的特异引物，墨西哥湾扇贝的多态性微卫星位点序号、及用于扩增所述墨西哥湾扇贝微卫星位点的特异引物对包括如下20个中的任一个，其的特征如下：

进一步的，所述墨西哥湾扇贝微卫星位点在基因库中对应的编号位置如下：

本发明提供一种墨西哥湾扇贝微卫星标记的构建方法，微卫星位点的筛选方法包括如下步骤：

(1)提取墨西哥湾扇贝的基因组DNA；

(2)以步骤(1)所述DNA为模板DNA，将所述模板DNA进行酶切，得到酶切DNA 片段；