[发明专利]用于检测或辅助检测幽门螺杆菌的引物组合物以及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测或辅助检测幽门螺杆菌的引物组合物以及试剂盒。本发明提供了一种特异引物组，由如下四个引物对组成：H2引物对、H3引物对、H4引物对和H5引物对；8条引物依次如序列表的序列3至序列12所示。本发明还保护一种引物组合，包括所述特异引物组和H48引物对，H48引物对的两条引物分别如序列表的序列11所示和序列表的序列12所示。本发明提供的引物组合具有高灵敏度和高准确度的优点，且操作简便、易于掌握，能够准确、有效地判断是否存在幽门螺杆菌感染以及是否存在东亚型幽门螺杆菌感染。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测或辅助检测幽门螺杆菌的引物组合物以及试剂盒。

背景技术

幽门螺旋杆菌(H.Pylori)是世界上最常见的病原体之一。流行病学研究表明幽门螺杆菌感染了世界范围内一半以上的人口。幽门螺旋杆菌在我国人群中的感染率高达60％，其中城市为50％，农村为68.8％，每年新感染病例超过1200万人。幽门螺旋杆菌是引起消化性溃疡和慢性活动性胃炎的主要病因，也是世界卫生组织于2012年认定其为胃癌第一类致癌原。及时地诊断并根除幽门螺旋杆菌是治愈胃病的前提。

细胞毒素相关基因(cytotoxin associated geneA,cagA)是幽门螺杆菌中重要的毒力基因，编码表达细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin associated protein A,CagA)，是幽门螺杆菌产生细胞毒性的重要效应蛋白，其与严重的胃炎、萎缩(atrophy)、异型增生(dysplasia)及胃腺癌有更高的相关性。cagA基因具有多态性，这种多态性可导致检测方法的敏感性差异，造成假阳性和假阴性结果的出现。

在临床应用方面，幽门螺杆菌的检查方法主要为经典的PCR方法，一般只用1对或2对引物进行PCR扩增。一方面，幽门螺旋杆菌的DNA突变性非常高，存在大量的变异，具有高度不一致性，单一引物PCR常常不能检测到DNA突变的菌种，很容易造成假阴性的结果。另一方面，只用一对PCR引物会有很高的概率与其他菌种或生物体的DNA片段具有同源性，而导致假阳性结果(例如目前常用的16S亚基序列虽具有保守性比较高的优点，但是它的特异性相对较低，因为所有的细菌核糖体中均有16S亚基序列，虽然在胃酸这一强腐蚀性的液体中能存活的细菌大多为幽门螺旋杆菌，但是在取样和DNA提取的过程中若发生细菌污染，则会影响检测结果，造成假阳性)。因此，现有方法的临床敏感性不是十分理想。

幽门螺杆菌分为西方型和东亚型，其中东亚型又称东亚高危型。东亚型的幽门螺杆菌毒力更高，更容易引起胃病的发展以及胃癌的发生。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测或辅助检测幽门螺杆菌的引物组合物以及试剂盒。

本发明提供了一种特异引物组(HP引物组)，由如下四个引物对组成：H2引物对、H3引物对、H4引物对和H5引物对；

H2引物对由引物H2-F和引物H2-R组成；引物H2-F为序列表的序列3所示的单链DNA分子；引物H2-R为序列表的序列4所示的单链DNA分子；

H3引物对由引物H3-F和引物H3-R组成；引物H3-F为序列表的序列5所示的单链DNA分子；引物H3-R为序列表的序列6所示的单链DNA分子；

H4引物对由引物H4-F和引物H4-R组成；引物H4-F为序列表的序列7所示的单链DNA分子；引物H4-R为序列表的序列8所示的单链DNA分子；

H5引物对由引物H5-F和引物h5-R组成；引物H5-F为序列表的序列9所示的单链DNA分子；引物H5-R为序列表的序列10所示的单链DNA分子。

本发明还提供了一种引物组合，包括所述特异引物组和H48引物对；H48引物对由引物H48-F与引物H48-R组成；引物H48-F为序列表的序列11所示的单链DNA分子；引物H48-R为序列表的序列12所示的单链DNA分子。