[发明专利]使用改良的肠杆菌科菌株制备L氨基酸的方法

权利要求书

1.一种重组的分泌L-氨基酸的肠杆菌科(Enterobacteriaceae)微生物，其包含具有启动子活性的DNA片段，所述DNA片段功能性地连接编码膜蛋白的多核苷酸，特征在于所述具有启动子活性的DNA片段包含SEQ ID NO:8。

2.权利要求1的微生物，特征在于所述具有启动子活性的DNA片段在3'末端连接携带核糖体结合位点的第二DNA片段。

3.权利要求1的微生物，特征在于所述具有启动子活性的DNA片段在3'末端连接具有SEQ ID NO:9的位置174-204的核苷酸序列的第二DNA片段。

4.权利要求1的微生物，特征在于所述具有启动子活性的DNA片段在3'末端连接具有SEQ ID NO:9的位置174-204的核苷酸序列的第二DNA片段，所述第二DNA片段在其3'末端连接编码所述膜蛋白的多核苷酸。

5.前述任一项权利要求的微生物，特征在于所述具有启动子活性的DNA片段在5'末端连接具有SEQ ID NO:9的位置1-138的核苷酸序列的DNA片段。

6.前述任一项权利要求的微生物，特征在于所述膜蛋白是具有氨基酸转运蛋白活性的蛋白质。

7.权利要求6的微生物，特征在于所述具有氨基酸转运蛋白活性的蛋白质是具有氨基酸输出蛋白活性的蛋白质。

8.权利要求7的微生物，特征在于所述具有氨基酸输出蛋白活性的蛋白质具有与SEQID NO:2的序列至少90％相同的氨基酸序列。

9.权利要求8的微生物，特征在于所述具有氨基酸输出蛋白活性的蛋白质具有与SEQID NO:2的序列至少95％相同的氨基酸序列。

10.权利要求9的微生物，特征在于所述具有氨基酸输出蛋白活性的蛋白质包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列，和/或特征在于所述具有氨基酸输出蛋白活性的蛋白质由包含SEQ IDNO:1的核苷酸序列的多核苷酸编码。

11.权利要求1-9任一项的微生物，特征在于所述具有启动子活性的DNA片段存在于所述微生物的染色体中，或者可选地，特征在于所述具有启动子活性的DNA片段位于染色体外复制载体上。

12.权利要求1-11任一项的微生物，特征在于其产生L-苏氨酸、L-高丝氨酸、L-组氨酸、L-赖氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸。

13.一种制备L-氨基酸或者含有L-氨基酸的饲料添加剂的方法，所述方法包含：

(i)在培养基中发酵权利要求1-12任一项的微生物；

(ii)富集发酵液和/或细胞中的所述L-氨基酸；及任选地

(iii)分离所述L-氨基酸。

14.一种具有启动子活性的DNA片段，其功能性地连接编码膜蛋白的多核苷酸，特征在于所述具有启动子活性的DNA片段包含SEQ ID NO:8。

15.包含SEQ ID NO:8的DNA片段作为调节编码膜蛋白或氨基酸转运蛋白的基因的表达水平的启动子的用途。