[发明专利]一株裂解性大肠杆菌噬菌体RDP-EC-16029的分离及应用

说明书

本发明公开了一株裂解性大肠杆菌噬菌体RDP‑EC‑16029的分离及应用，该噬菌体宿主为禽大肠杆菌E10，该噬菌体在双平板上能形成直径在0.5‑1毫米的噬菌斑；透过电镜观察噬菌体有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径约70nm，有一个长约120nm的尾，有尾鞘，颈部连着头部和尾部，为有尾病毒目肌尾病毒科；该噬菌体在pH6.0−9.0范围能维持较好的活性，在pH为8.0时，噬菌体效价最高；在30‑40℃效价基本不变；可高效感染宿主菌禽大肠杆菌E10，对养殖环境中禽大肠杆菌E10具有强裂解效用，为工业化生产噬菌体用于养殖环境中禽大肠杆菌E10的防治提供了噬菌体来源。

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别是涉及一种裂解性大肠杆菌噬菌体RDP-EC-16029的分离及应用。

背景技术

近年来，我国畜牧业发展迅速，规模化、集约化畜禽饲养场呈急剧上升趋势，因此导致饲养密度过大、养殖环境下降等多种问题的出现，使致病菌大量增殖，降低动物对病原菌的抵抗力。因此，抗生素的使用已非常普遍，虽然抗生素治疗有显著效果，但是使用抗生素后动物产生的耐药性也非常显著，超级细菌的出现就是抗生素滥用产生的严重结果之一。现在各国均意识到抗生素滥用产生的问题，在发达国家无抗养殖已经开始流行，瑞典早在1986年迈出第一步，全面禁止抗生素用作饲料添加剂。丹麦也陆续禁止了多种抗生素作为生长促进剂使用，欧盟在2006年全面禁止饲料中添加抗生素。随着我国出台的有关政策，无抗养殖已经成为大趋势。早在2000年，我国就有人研究无抗养殖，通过乳酸菌技术、中兽药技术等的应用，在小范围内实现无抗养殖，近年来，采用复合微生态制剂的无抗饲料有一定的使用效果，但是由于技术不成熟、养殖效益等原因，未能大规模推广。

对于细菌性疾病，噬菌体治疗有显著效果。1896年，英国科学家Ernest Hankin首次报道了微生物中存在某种抗菌活性物质的现象。两年后，俄罗斯微生物学家NikolayGamaleya在枯草芽孢杆菌中观察到了类似现象。1915年英国科学家Frederick Twort在培养金黄色葡萄球菌的过程中，首次发现菌落上有透明斑出现，并将这一现象解释为病毒感染。1917年，巴黎巴斯德研究所的法裔加拿大微生物学家Felix d’Herelle将这些抗菌活性物质解释为由寄生在细菌中的病毒引起的，并正式命名为噬菌体，噬菌体的研究也由此开始。但是由于人们对于病毒制剂的接受度较低，随着二战期间青霉素等抗生素的出现，科学家们对噬菌体疗法基本放弃研究，开始投入到抗生素研究的洪流中，从1950年-1980年，关于噬菌体治疗细菌性疾病的研究陷入了停顿。1980年后，超级细菌的出现，再加上抗生素滥用导致的问题，人们又重新将目光投回到噬菌体治疗上。

噬菌体治疗细菌性疾病具有很多优势。例如，起效快，2-4小时就能杀死病原菌，缓解症状，改善养殖动物的精神状态；对养殖动物安全，噬菌体特异性强，只能杀死相对应的病原菌，对动物肠道有益微生物不会有副作用，因此不会破坏肠道菌群，而抗生素在杀灭病原菌的同时，会导致微生态失衡，引起机会性感染甚至更严重的全身性感染；环境友好，噬菌体是宿主依赖性的，只有在宿主存在时才会发生作用，随着宿主的死亡而死亡，不会在体内残留；防止细菌耐药性，噬菌体作用机制与抗生素不同，治疗效果不受细菌耐药性的影响；基本没有副作用，长期以来，噬菌体在人体、动物、食品中的应用已经有了悠久历史，很少有严重的副作用。

本发明在于相应国家全面禁抗的号令，解决细菌耐药性，抗生素滥用的问题，从禽粪便中分离纯化出一株裂解性大肠杆菌噬菌体，为禽大肠杆菌的防治提供更多的可能性。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一株治疗禽大肠杆菌病的，安全可靠的裂解性大肠杆菌噬菌体RDP-EC-16029，噬菌体RDP-EC-16029被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2019年7月10日，保藏编号为CGMCC No.18196，并提供一株生产该噬菌体的病原菌E10。

本发明的另一目的在于提供该噬菌体在治疗禽大肠杆菌病中的应用，提供该病原菌在生产该噬菌体的应用。