[发明专利]肉豆蔻木脂素在治疗弓形虫病中的应用

说明书

本发明公开了肉豆蔻木脂素在治疗弓形虫病中的应用。当培养基中加入肉豆蔻木脂素后加入弓形虫速殖子孵育2h，弃去药物培养基继续培养24h，肉豆蔻木脂素的浓度高于60μg/mL时，可以完全抑制虫体的入侵并呈剂量依赖。当肉豆蔻木脂素的浓度的升高，处理孔内的包囊数，速殖子数，和纳虫囊泡内的平均虫体数均降低呈剂量依赖。肉豆蔻木脂素对弓形虫速殖子的半数抑制浓度IC₅₀值为31.32μg/mL。肉豆蔻木脂素可以抑制弓形虫速殖子的入侵和胞内复制，保护弓形虫急性感染的小鼠，超微结构观察显示，肉豆蔻木脂素对弓形虫的抑制作用与线粒体有关。本发明表明肉豆蔻木脂素细胞毒性小，可以安全有效的治疗弓形虫病。

技术领域

本发明涉及肉豆蔻木脂素在治疗弓形虫病中的应用。

背景技术

弓形虫是专性胞内寄生原虫，隶属于顶复门(Apicomplexa)孢子虫纲(Sporozoasida)球虫亚纲(Coccidiasina)真球虫目(Eucoccidiorida)艾美耳亚目(Eimeriina)弓形虫科(Toxoplasmatidae)弓形虫属(Toxoplasma)，弓形虫属下只有一个种，为刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)常称其为弓形虫。

免疫系统正常的个体来说，患弓形虫病临床表现一般为无症状，而在免疫缺陷患者中就可能会危及生命。在这些免疫缺陷患者中，弓形虫病几乎都是反复发作的。弓形虫病的典型的临床表现为：单纯性的颈部或枕部淋巴结肿大。而弓形虫感染引起的视网膜脉络膜炎经常呈现覆膜的白色病灶和强烈的玻璃体炎症反应。中枢神经系统是受感染最典型和最严重的部位。弓形虫感染引起中枢神经系统受损，造成脑炎，临床表现包括精神状态改变、癫痫发作、局部运动障碍、颅神经紊乱、感觉异常、小脑症候、运动障碍和神经精神病的症状。免疫功能低下的弓形虫病患者也会发生脉络膜视网膜炎、肺炎，常表现为急性呼吸衰竭和类似感染性休克的血液动力学异常。在骨髓移植患者和艾滋病患者中，弓形虫肺炎似乎更为常见。胎儿先天性弓形虫病临床表现为脑积水、小头畸形、颅内钙化、脉络膜视网膜炎、斜视、失明、癫痫、智力障碍、血小板减少引起的出血和贫血等。

临床治疗通常用乙胺嘧啶、磺胺嘧啶和叶酸的联合应用治疗弓形虫感染，但治疗常常伴有副作用，且治疗不彻底，易复发。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术中治疗弓形虫感染，治疗常常伴有副作用，且治疗不彻底，易复发的缺陷，提供一种肉豆蔻木脂素在治疗弓形虫病中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

肉豆蔻木脂素对人包皮成纤维细胞的半数抑制浓度为：100μg/mL。

为考察肉豆蔻木脂素对弓形虫速殖子入侵HFF细胞的影响，在培养基中加入肉豆蔻木脂素后加入弓形虫速殖子孵育2h，弃去药物培养基继续培养24h，用Giemsa染色观察肉豆蔻木脂素对弓形虫入侵宿主细胞的影响，试验结果显示甘草查尔酮的浓度高于60μg/mL时，可以完全抑制虫体的入侵并呈剂量依赖。

为确定肉豆蔻木脂素的抗虫体增殖效果和准确测定对虫体增殖的IC₅₀，首先，建立了用荧光定量PCR仪评价虫体荷载量的方法，并采用此方法对不同浓度的肉豆蔻木脂素作用下的虫体荷载量进行测定，计算肉豆蔻木脂素对弓形虫的IC₅₀。同时，用Giemsa染色法观察不同浓度的肉豆蔻木脂素对弓形虫增殖的影响。结果显示，建立的评价虫体荷载量的荧光定量PCR的方法精密度和回收率的RSD值均小于5。Giemsa染色表明：随着肉豆蔻木脂素的浓度的升高，处理孔内的包囊数，速殖子数，和纳虫囊泡内的平均虫体数均降低呈剂量依赖。用荧光定量PCR测定在各个肉豆蔻木脂素浓度下的虫体荷载量，结果与Giemsa 染色结果一致，并且通过计算得出，肉豆蔻木脂素对弓形虫速殖子的半数抑制浓度IC₅₀值为31.32μg/mL。