[发明专利]检测FAV-8和FAV-11的特异性引物及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测FAV‑8和FAV‑11的特异性引物，包括用于检测FAV‑8的检测引物，如SEQ ID NO.1、2所示，和用于检测FAV‑11的检测引物，如SEQ ID NO.3、4所示。一种检测FAV‑8和FAV‑11的试剂盒，包括上述特异性引物。一种检测并鉴别FAV‑8和FAV‑11的双重荧光定量PCR方法：(1)提取病料核酸；(2)PCR反应；(3)扩增后，对扩增产品进行检测，根据双重荧光定量PCR扩增曲线和溶解曲线Tm值来区分FAV‑8与FAV‑11：若Tm值为88.21℃‑88.81℃，则检测结果为FAV‑8阳性；若Tm值为93.15℃‑93.80℃，则检测结果为FAV‑11阳性。本发明对FAV‑8和FAV‑11的最低检出量分别为31copies/μL和34copies/μL，具有敏感性高、特异性好等优点，在临床上具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种检测并鉴别常见血清型鸡包涵体肝炎感染的检测方法，具体涉及一种用于检测并鉴别禽腺病毒血清8型(FAV-8)和禽腺病毒血清11型(FAV-11)的特异性引物及试剂盒，属于生物检测技术领域。

背景技术

禽腺病毒(Fowl adenovirus，FAV)属于禽腺病毒科禽腺病毒属，分为3个群，其中Ⅰ群禽腺病毒包含12个血清型。鸡包涵体肝炎(Inclusion body hepatitis in chicken,IBH)是由Ⅰ群禽腺病毒感染引起的一种鸡急性传染病，主要症状是鸡群死亡率突然增加，其中以3～4周龄最多发，发病率可达到10～20％，死亡率较低，一般不超过5％，发病后5～7天又恢复正常。患病鸡主要表现为精神沉郁，食欲不振，嗜睡，鸡冠发白，羽毛杂乱。剖检可见以肝脏发黄、肿大、变脆等为主要病变特征的包涵体肝炎，较少出现心包积液，部分肾脏肿大，呈淡黄色，脾脏也伴有肿大，骨髓呈淡红色至淡黄色。近几年来该病在我国肉鸡中流行有上升的趋势。目前，在我国由Ⅰ群禽腺病毒导致的疾病主要有两种：一是心包积液-肝炎综合征，主要由血清4型引起，典型症状为心包中出现淡黄色、凝胶样物质；二是包涵体肝炎，主要由FAV-8和FAV-11引起，而这两种血清型病毒感染从临床症状和病变上无法区分，给该病的防治带来了很大难度。急需建立一种可快速、准确地区分鸡包涵体肝炎血清8型和11型禽腺病毒感染的检测方法。

发明内容

针对上述现有技术，为解决鸡包涵体肝炎这两种病毒感染在临床上难以区分的问题，本发明提供了一种用于检测并鉴别禽腺病毒血清8型(FAV-8)和禽腺病毒血清11型(FAV-11)的特异性引物及试剂盒。本发明利用荧光定量PCR技术快速、准确、敏感性高的特点，设计了特异性引物，建立了一种用于区分鸡包涵体肝炎血清8型和11型禽腺病毒感染的检测方法，适用于实际生产。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种用于检测FAV-8和FAV-11的特异性引物，包括用于检测FAV-8的检测引物，和用于检测FAV-11的检测引物；所述用于检测FAV-8的检测引物的核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，其扩增片段大小为92bp；

FAV8-RTF4:5′-AAGGACAGCAGCGTCGTCT-3′；

FAV8-RTR4:5′-TGCGGCTTGATGATGTCGATA-3′；

所述用于检测FAV-11的检测引物的核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.3和SEQID NO.4所示，其扩增片段大小为171bp；

FAV11-RTF1:5′-CGGGGAAGGACCACACC-3′；

FAV11-RTR1:5′-GAAGCGGACGAGGGCAG-3′。

上述引物在制备检测FAV-8和FAV-11的试剂盒中的应用。

一种检测FAV-8和FAV-11的试剂盒，包括上述特异性引物。