[发明专利]一种山药酵素液的制备及其中游离氨基酸的检测方法

说明书

本发明涉及一种具有保健功能的山药酵素产品。一种山药酵素液的制备方法，对制得的山药汁进行发酵处理，加入蔗糖，调节糖浓度为8‑12%，再加入1.0‑1.4%的蛋白胨，搅拌均匀后，调节山药汁的初始pH 5.0；高压灭菌处理，冷却；在山药发酵基质中接种0.1‑0.4%的活化后的酵母菌液，恒温振荡培养，以150 r/min的转速振荡发酵22‑26 h；发酵结束后，再接种1%‑5%的乳酸菌，恒温培养，静置发酵32‑40 h。一种反相高效液相色谱检测山药酵素液中游离氨基酸的方法，取山药酵素液高速离心处理，取上清液密封保存，用于下一步衍生；以DNFB为柱前衍生试剂，使用色谱柱，以流动相A为pH 4.8、浓度为0.05 mol/L的乙酸钠溶液，流动相B为体积比为1：1的乙腈水溶液，梯度程序洗脱50 min对其氨基酸含量进行检测。

技术领域

本发明涉及一种具有保健功能的山药酵素产品，及利用反相高效液相色谱法检测山药酵素液中游离氨基酸的方法。

背景技术

山药又称为薯蓣，是中药中的补益材料之一，具有药食两用的功效，物美价廉、口感较好且具有保健功能。其中，铁棍山药因其中所含成分的营养价值较高，含有较多的粘液质和淀粉，同时还含有皂苷、胆碱、山药碱、氨基酸、多种酶、维生素C、碘质等，且含有一些人体必需的微量元素，如钙、铁、锌、铜、锰等，为怀山药中的“极品”。

酵素是以一种或多种物质为原料，利用对身体有益的菌种进行发酵，而得到的含有活性菌和多种酶的发酵产品。酵素产品有很多种功效，例如酵素产品具有抗氧化性、消炎抑菌、醒酒、保护肝脏、维护肠道菌群的平衡、预防心脑血管疾病等作用，2009年，C.Santa-María等研究发现，米糠（糙米发酵物）具有较好的抗氧化性，能够阻止人角质形成细胞单层受到辐射，可防止33%的脂质过氧化。2018年，邹璐等研究表明，铁皮石斛酵素液含人体内7种必需氨基酸，且肌肽含量较高，具有较好的抗氧化性及清除自由基的能力。

因此，将怀山药进行微生物发酵处理后，不仅可以改善传统的食用方法，增加其独特的风味，并且可在原有基础上进一步增加其营养性能。现有的发酵技术及产品，多采用多种原料混合发酵，对于不同的原料最佳发酵时间不同，可能导致部分原料发酵不全，进而影响制品的稳定性及风味口感，且发酵时间长至数月或近乎一年，生产周期长，成本高，效率低，严重影响其经济效益。因此，很有必要对现有生产工艺进行改进。

而且，为有效地控制山药酵素液产品的质量，需要对其氨基酸含量进行检测。使用氨基酸分析仪是氨基酸定量分析中最重要的方法，这种方法在使用过程中操作简单，在测定时不需要对氨基酸进行柱前或柱后的衍生，但是该方法使用时需要专门的设备和试剂，花费的成本比较高，这使该方法的使用范围受到了限制。高效液相色谱法测定氨基酸，不需要特殊的反应装置，具有简洁、高效、价格低廉等优点，目前已成为一种国内外较常用的分析氨基酸的方法。在氨基酸衍生前，我们并不能直接用紫外或可见光吸收的方法检测，是因为较多的氨基酸中不含可见光吸收基团或芳香环等紫外光吸收基团，而且也不含荧光发色基团，所以也不能用荧光法检测。因此，需要将氨基酸进行处理，使其成为具有较强紫外或荧光吸收的衍生物。氨基酸的衍生方法又分为柱前衍生法和柱后衍生法。但柱后衍生法需要附加装置，该装置价格昂贵，而且分析时花费的时间较长，所以目前大多数研究者都采用柱前衍生法。

柱前衍生法常用的衍生试剂有DNFB、PITC、OPA、FMOC-Cl等，每种试剂都各有优缺点。DNFB柱前衍生化法具有操作比较简单，成本相对较低；衍生产物比较稳定等优点，因此本发明采用DNFB柱前衍生化法对山药酵素液中的氨基酸进行柱前衍生。

发明内容

本发明针对现有技术不足，提出一种山药酵素液的制备方法，通过选择酵母菌和乳酸菌对山药汁进行复合发酵得到山药酵素液，开发出一种具有保健功能的山药酵素产品，充分提高了山药的附加值；发酵方法简单快速，生产周期短，生产效率高；