[发明专利]一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法

权利要求书

1.一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于：所述犬C反应蛋白快速定量分析检测卡包括PVC底板(1)、样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水滤纸(5)，所述样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水滤纸(5)设置在PVC底板(1)上并依次衔接，所述结合垫(3)上预包被荧光微球标记的抗-CRP单克隆抗体Ab1，所述硝酸纤维膜(4)上设有一条包被羊抗-鼠IgG单克隆抗体的质控C线(6)和一条包被抗-CRP单克隆抗体Ab2的检测T线(7)。

2.根据权利要求1所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述样品垫(2)的制备方法包括如下步骤：

(1)配置样品垫处理液：含1％牛血清蛋白、2％聚乙二醇4000和0.5％Triton X-100的甘氨酸缓冲液；

(2)将样品垫处理液以0.5μl/cm²的量比喷涂在样品垫(2)上。

3.根据权利要求1所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述结合垫(3)的制备方法包括如下步骤：

将用荧光微球标记的-CRP单克隆抗体Ab1按3.5μl/cm²的量比喷涂在结合垫(3)上。

4.根据权利要求1所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(4)的制备方法包括如下步骤：

(1)用含3％蔗糖的pH＝7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液将羊抗-鼠IgG单克隆抗体稀释至1mg/mL，即为质控C线工作液；

(2)用含3％蔗糖的pH＝7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液将抗-CRP单克隆抗体Ab2稀释至1mg/mL，即为检测T线工作液；

(3)取PVC底板(1)，粘贴硝酸纤维膜(4)；

(4)在硝酸纤维膜上划质控C线(6)和检测T线(7)，划线浓度均为1μl/cm；

(5)将完成划线的粘贴硝酸纤维膜(4)的PVC底板(1)置于干燥箱中35～40摄氏度干燥处理。

5.根据权利要求1所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述荧光微球标记的抗-CRP单克隆抗体Ab1的制备方法包括如下步骤：

(1)将1mL标记缓冲液0.1M MES缓冲液和1mg荧光微球加入到离心管中，涡旋均匀；

(2)在上述离心管中加入20～50μL标记活化剂A和20～50μL标记活化剂B，在旋转培养器上活化30min；

(3)将活化后的荧光微球离心处理30min，保留沉淀，加入500μL淬灭剂，90W功率超声处理，每个超声周期中超声2s，间歇5s，完成1～3个超声周期；

(4)在淬灭后的荧光微球中加入20～200μg抗-CRP单克隆抗体Ab1，涡旋均匀，在旋转培养器上活化30min；

(5)加入2mL标记封闭液，超声2s，间歇5s，重复3次，在旋转培养器上活化30min；

(6)离心处理30min，保留沉淀，加入2mL标记荧光球稀释液，90W功率超声处理，每个超声周期中超声2s，间歇5s，完成3～5个超声周期。

6.根据权利要求5所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述荧光微球为含有稀土铕元素的荧光错配物的聚苯乙烯微球，所述荧光微球的密度为1.05g/cm³，所述荧光微球的的直径为300nm，所述荧光微球的功能基团为羧基。

7.根据权利要求5所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述标记活化剂A为含50mg/mL NHS的MES缓冲液，所述标记活化剂B为含50mg/mL EDC的MES缓冲液。

8.根据权利要求5所述的一种犬C反应蛋白快速定量分析检测卡及其制备方法，其特征在于，所述标记封闭液为含3％牛血清蛋白的0.04M pH＝8.0的乙醇胺溶液，所述标记荧光微球稀释液为含1％牛血清蛋白、0.5％牛丙种球蛋白、3％蔗糖的甘氨酸缓冲液，所述淬灭剂为含0.25％甲醇的MES缓冲液。