[发明专利]一种改进的小鼠肝脏脂滴油红O染色方法

说明书

本发明涉及一种改进的小鼠肝脏脂滴油红O染色方法，属于脂滴检测的技术领域。本发明所述方法包括冰冻切片的制备；所述冰冻切片的制备包括组织固定步骤、组织脱水步骤、组织切片步骤；其中，所述组织固定步骤为：将新鲜的小鼠肝脏采用10％福尔马林固定3天‑10天；所述组织脱水步骤为：将固定后的小鼠肝脏先采用15％蔗糖溶液浸泡24小时，再采用30％蔗糖溶液浸泡24小时。本发明先采用10％福尔马林对小鼠肝脏进行固定，再采用15％蔗糖溶液和30％蔗糖溶液对小鼠肝脏进行梯度脱水，有利于提高染色结果判断的准确性。

技术领域

本发明涉及一种改进的小鼠肝脏脂滴油红O染色方法，属于脂滴检测的技术领域。

背景技术

油红O脂肪染色法是指在日常病理诊断和科研工作中为了显示组织内的脂肪常采用油红O进行染色的方法，油红O为脂溶性染料，在脂肪内能高度溶解，可特异性的使组织内甘油三酯等中性脂肪着色，以显示组织和细胞内脂滴的含量和大小。

但是，目前小鼠肝脏组织内脂滴油红O染色并没有统一的技术标准，各种油红O染色的方法和操作步骤存在着差异，同时，传统的油红O脂肪染色法还存在一些缺陷，例如：现有油红O染色液在染色时易在组织切片上留下红色结晶等等，给染色结果的准确判断带来了影响，容易造成错误判断。

发明内容

本发明通过对现有油红O脂肪染色法的改进，使染色结果可靠，提高了染色结果判断的准确性，解决了上述的问题。

本发明提供了一种改进的小鼠肝脏脂滴油红O染色方法，所述改进的小鼠肝脏脂滴油红O染色方法包括冰冻切片的制备；所述冰冻切片的制备包括组织固定步骤、组织脱水步骤、组织切片步骤；其中，所述组织固定步骤为：将新鲜的小鼠肝脏采用10％福尔马林固定3天-10天；所述组织脱水步骤为：将固定后的小鼠肝脏先采用15％蔗糖溶液浸泡24小时，再采用30％蔗糖溶液浸泡24小时。

本发明所述的新鲜是指在小鼠麻醉情况下眼球放血后迅速解剖得到的肝脏，没有变质、没有遭受过多的污染。

本发明所述的10％福尔马林是指甲醛含量为10％的水溶液。

本发明所述的15％蔗糖溶液是指蔗糖含量为15％的水溶液。

本发明所述的30％蔗糖溶液是指蔗糖含量为30％的水溶液。

本发明优选为所述组织切片步骤为：将脱水后的小鼠肝脏切片，切片的厚度为8μm-10μm，-80℃～-60℃保存组织切片。

本发明优选为所述改进的小鼠肝脏脂滴油红O染色方法包括组织切片的油红O染色；所述组织切片的油红O染色包括如下步骤：将冻存的组织切片取出，冷风吹干；10％福尔马林-1％氯化钙固定液固定15min-20min；油红O染色液染色10min-15min；50％乙醇分化；水洗终止分化。

本发明所述的冷风是指冷空气流通形成的风。

本发明所述的50％乙醇是指100体积的乙醇溶液中含有50体积乙醇。

本发明优选为所述组织切片的油红O染色还包括如下步骤：水洗终止分化后苏木素复染核；水中浸泡，返蓝；甘油明胶封片。

本发明优选为所述油红O染色液的制备方法为：将每0.5g的油红O加入到100mL的60％异丙醇中混匀，过滤，得到油红O染色液的储备液，4℃避光保存；在使用时，将油红O染色液的储备液与超纯水按体积比3：2混匀，过滤，并在2小时内染色、显微镜下观察。

本发明所述油红O优选为粉末状。

本发明优选为所述60％异丙醇的制备方法为：将异丙醇与超纯水按体积比3：2混匀。