[发明专利]一种筛查稽留流产风险的生物标志物集合及筛查方法

说明书

本发明公开了一种用于筛查稽留流产风险的生物标志物集合，使用该标志物集合能够提前预判稽留流产风险。本发明还公开了一种筛查稽留流产风险的方法，包括提取受试者的阴道分泌物中的DNA，扩增16S rDNA的V4区，利用测序方式分析扩增产物，进行结果判断；其中，结果判断使用如上所述的生物标志物集合。该生物标志物集合以及筛查方法有助于降低稽留流产的发生，提高IVF植入成功率，指导育龄妇女优生优育。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其涉及一种筛查稽留流产风险的生物标志物集合及筛查方法。

背景技术

稽留流产又称过期流产或死胎不下，是指胚胎停止发育后2个月尚未自然排出者,称为稽留流产。稽留流产后已死亡的胚胎及胎盘组织如在宫腔内稽留，胎盘机化，易与子宫壁紧密粘连、不易剥离，极易发生流产不全、流产感染；若稽留时间过长，退行性变的胎盘组织释放出凝血活酶进入母体循环，可导致严重的凝血功能障碍，继发弥散性血管内凝血，发生大出血等并发症，更有甚者需行子宫切除术以止血，严重者可致死亡。稽留流产给患者带来巨大的心理和生理压力。此外，稽留流产可能导致的复发性流产及体外受精-胚胎移植(IVF-ET)植入的“珍贵儿”流产给患者身心造成更大的伤害，也给患者家庭带来极大的痛苦。如何预防稽留流产的发生，尤其是如何快速准确的对染色体正常胚胎的怀孕母体进行稽留流产风险筛查，预防稽留流产的发生，是目前临床亟待研究解决的问题。

现行孕前检查项目包括静脉血检测血常规、肝功能、妇科内分泌、ABO溶血、脱畸全套、染色体异常；尿常规检测肾功能；阴道分泌物检测滴虫、霉菌、支原体、衣原体等妇科炎症和性传播疾病，尚未涉及稽留流产的高风险筛查。因此，提供有效诊疗靶标，建立稽留流产高风险筛查的孕前检查技术以有效指导育龄妇女优生优育显得尤为重要。

女性生殖道是人体重要的微生态区，其中有多种微生物生长于阴道粘膜表面，在这一局部微生态系统中，微生物与微生物之间、微生物与宿主之间相互作用，达到平衡，使微生物与宿主形成共生状态。健康的阴道微生物菌群是由一种或几种乳酸杆菌(Lactobacillus)占主导地位的微环境结构，特别是在妊娠期间，阴道微生物菌群结构向着主要由一种或两种乳酸杆菌的结构转变。在正常阴道微生物菌群中，优势菌乳酸杆菌通过分泌乳酸(维持酸性环境)、分泌抑菌素、竞争营养物质(如糖原)、空白占位(竞争粘附阴道上皮细胞)，以及刺激阴道局部免疫来抑制其他寄生菌生长，从而抵御病原体的入侵。异常的阴道菌群或阴道微生态紊乱会导致不良妊娠结局和辅助生殖成功率低等生殖健康问题。近年来，病原体感染引起的流产、早产和孕中期胎膜早破等问题已被重视，输卵管不孕、早产等妊娠相关疾病在一定程度上与阴道微生物组成变化有关。母体-阴道细菌之间的相互作用有可能在决定妊娠结局方面发挥着重要作用。

高通量测序技术是新一代测序技术，此技术可以同时对数百万个短序列读长进行测序。测序时间短，结果精确，测序成本低，目前已广泛应用于基因组序列分析。目前此方法还未报道用于阴道菌群微生物测序。

16S rDNA是细菌染色体上编码rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因中。16SrDNA种类少，含量大(约占细菌DNA含量的80％)，分子大小适中，既能体现不同菌属之间的差异，又能利用测序技术较容易地得到其序列，因此，16S rDNA扩增子测序技术已经成为微生物群落结构研究的一种成熟有效的技术，但尚无报道将此方法应用于分析阴道菌群种类和丰度，并判断阴道菌群与稽留流产相关性。

因此，本领域的技术人员致力于开发一种筛查稽留流产风险的生物标志物集合，以及稽留流产风险筛查方法。

发明内容

限于已有孕前检查技术及DNA测序技术的成本高、时间长等因素，目前尚未建立筛查稽留流产风险的生物标志物集合及筛查方法，本发明所要解决的技术问题是提供一种筛查稽留流产风险的生物标志物集合及筛查方法。

本发明的第一个方面提供了一种用于筛查稽留流产风险的生物标志物集合，包括：