[发明专利]用于提高莱鲍迪苷D和莱鲍迪苷M之产生的方法

权利要求书

1.能够从甜菊醇糖苷产生莱鲍迪苷M的重组宿主细胞，所述细胞包含：

(a)编码能够使所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C2’位β-1，2糖基化之第一多肽的第一重组基因，其中所述第一多肽包含与SEQ ID NO：16所示氨基酸序列具有65％或更高序列同一性的多肽；以及

(b)编码能够使所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C3’位β-1，3糖基化之多肽的基因；

其中所述甜菊醇糖苷是覆盆子苷、甜菊苷、莱鲍迪苷A或莱鲍迪苷E。

2.能够产生莱鲍迪苷M的重组宿主细胞，所述细胞包含：

(a)编码能够从法尼基二磷酸(FPP)和异戊烯基二磷酸(IPP)合成牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(GGPP)之多肽的基因；

(b)编码能够从GGPP合成内部柯巴基二磷酸之多肽的基因；

(c)编码能够从内部柯巴基焦磷酸合成内部-贝壳杉烯之多肽的基因；

(d)编码能够从内部-贝壳杉烯合成内部-异贝壳杉烯酸之多肽的基因；

(e)编码能够从内部-异贝壳杉烯酸合成甜菊醇之多肽的基因；

(f)编码能够还原细胞色素P450复合物之多肽的基因；

(g)编码能够使甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C2’位β-1，2糖基化之第一多肽的第一基因，其中所述第一多肽包含与SEQ ID NO：16所示氨基酸序列具有65％或更高序列同一性的多肽；

(h)编码能够使甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C2’位β-1，2糖基化之第二多肽的第二基因，其中所述第二多肽包含与SEQ ID NO：15或86所示氨基酸序列具有90％或更高序列同一性的多肽、在SEQ ID NO：15的第211和286位残基处具有替换的多肽、或其组合；

(i)编码能够使所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C3’位β-1，3糖基化之多肽的基因；

(j)编码能够在甜菊醇或甜菊醇糖苷的C-13羟基处将其糖基化之多肽的基因；以及

(k)编码能够在甜菊醇或甜菊醇糖苷的C-19羧基处将其糖基化之多肽的基因；

其中至少一种所述基因是重组基因。

3.能够使甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C3’位β-1，3糖基化的多肽，其中所述多肽包含SEQ ID NO：2的至少一种氨基酸替换，所述氨基酸替换为Q23G、Q23H、T55K、T55E、S56A、I26F、I26W、Y128S、Y128E、T146A、T146G、T146P、H155L、H155R、Q198R、S285R、S285T、S253W、S253G、L257P、L257W、L257T、L257G、L257A、L257R、L257E、S283N、T284R、T284G、S285G、K337E、K337P和L379V。

4.组合物，其包含约1％至约99％w/w莱鲍迪苷M，其中所述组合物与甜菊提取物相比，来自甜菊的污染物的水平降低。

5.组合物，其包含约1％至约99％w/w的莱鲍迪苷D，其中所述组合物与甜菊提取物相比，来自甜菊的污染物的水平降低。