[发明专利]一种抗盐碱黄柄曲霉菌及其分离方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗盐碱黄柄曲霉菌及其分离方法和应用，在250.0g/L含有不同浓度NaCl的PDA培养基固体平板上涂布经过梯度稀释的秸秆粉悬浮液，处理重复3次，培养4‑15天后挑取生长良好的单菌落，接种于筛选培养基CMC‑Na固体培养基上，产生透明圈状的菌株，得到黄柄曲霉菌，保藏名称：黄柄曲霉W3；保藏编号：CGMCCNO.17973；本发明中的黄柄曲霉菌菌株可在高盐碱环境下降解秸秆，且在高盐碱环境下对秸秆的降解能力高，还可以直接用于田间的秸秆发酵等生物物质的分解，对次生盐渍化或连作障碍土壤的改良与环境污染处理能力高，可以产生良好的处理效果。

技术领域

本发明涉及微生物学工程与技术领域，尤其涉及一种抗盐碱黄柄曲霉菌及其分离方法和应用。

背景技术

我国秸秆资源丰富，来源广泛，居世界首位，特别是农业改革以来，随着粮食产量的大幅增长，农作物秸秆产量也快速增加，已经成为我国秸秆资源的重要来源。随着科学技术的不断发展，秸秆的利用领域也得到了极大的拓展，如秸秆可作为燃料、饲料、基料(育苗基质)、工业原料等等。但目前农作物秸秆资源化综合利用率仍然较低，多为粗放处理，甚至直接在田间地头直接焚烧，既给环境造成严重的污染，也意味着肥料的大量流失，已引起了全社会的广泛关注；

高抗盐碱真菌是从高盐、高碱或高盐碱共存环境中分离的微生物资源，具有重要的研究、应用与开发价值，因此高抗盐碱真菌的挖掘、开发和利用意义重大。目前，人们已将这些高抗盐碱真菌应用于环境治理中，如盐碱地的修复改造、淤泥污水的净化处理，以及农业废弃物的循环利用等；

利用微生物降解秸秆并还田是改良土壤，特别是修复盐碱土壤的一种重要措施，但目前市面上的大部分微生物菌剂在正常土壤中可以发挥很好的作用，而在盐碱土壤中，由于高浓度的盐和高PH值的环境，这些菌株很难发挥应有的作用，为了是盐碱地秸秆能在短时间内被高效降解、实现肥料还田，从盐碱土壤中筛选高抗盐碱真菌是十分有必要的，因此本发明提出一种抗盐碱黄柄曲霉菌及其分离方法和应用，以解决现有技术中的不足之处。

发明内容

针对上述问题，本发明提出一种抗盐碱黄柄曲霉菌及其分离方法和应用，本发明中的黄柄曲霉菌菌株可在高盐碱环境下降解秸秆，且在高盐碱环境下对秸秆的降解能力高，还可以直接用于田间的秸秆发酵等生物物质的分解，对次生盐渍化或连作障碍土壤的改良与环境污染处理能力高，可以产生良好的处理效果。

本发明提出一种抗盐碱黄柄曲霉菌，所述抗盐碱黄柄曲霉菌于 2019年06月14日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏名称：黄柄曲霉W3；分类命名：黄柄曲霉(Aspergillus flavipes)；保藏编号：CGMCC NO.17973。

一种抗盐碱黄柄曲霉菌的分离方法，包括以下步骤：

步骤一：在250.0g/L含有不同浓度NaCl的PDA培养基固体平板上涂布经过梯度稀释的秸秆粉悬浮液，每个PDA培养基固体平板上处理重复3次；培养4-15天后挑取生长良好的单菌落保存备用；

步骤二：将步骤一中挑取后进行保存备用的单菌落接种于筛选培养基CMC-Na固体培养基上，产生透明圈状的菌株；

步骤三：将步骤二中产生的透明圈状的菌株进行保藏，并进行 ITS序列鉴定，以得出鉴定结果。

进一步改进在于：所述步骤一中PDA培养基由10g玉米秸秆粉、4g(NH₄)₂SO₄、0.5gMgSO₄·7H₂O、2gKH₂PO₄、1g蛋白胨、16g琼脂和 1000mL去离子水组成。

进一步改进在于：所述步骤一中的秸秆粉悬浮液为4-6cm厚的含有秸秆样品的秸秆土壤表层土样于4℃保存、稀释并取上清液后得到秸秆粉悬浮液。