[发明专利]用于恒温扩增检测鼠疫杆菌的核酸序列、试剂盒及方法和应用

说明书

本发明涉及病原体微生物检测领域，具体讲，涉及一种用于恒温扩增检测鼠疫杆菌的核酸序列、试剂盒及检测方法和应用。本发明的核酸序列包含SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的链置换引物序列、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的探针和SEQ ID No.5所示的交叉扩增引物序列。本发明试剂盒及检测方法具有特异性好、灵敏度高、步骤简单、可重复性高的技术优势。

技术领域

本发明涉微生物检测领域，具体讲，涉及一种用于恒温扩增检测鼠疫杆菌的核酸序列、试剂盒及方法和应用。

背景技术

鼠疫是由鼠疫杆菌(耶尔森氏菌属)引起的一种广泛流行于人类和啮齿动物的自然疫源性疾病，主要以蜱、蚤等传播媒介为主。目前自然界中已有数百种动物被证实可以感染鼠疫。由于生态环境的因素及传播方式的多样化，鼠疫在自然界动物中广泛流行，如鼠类、兔类、旱獭等。鼠疫耶尔森氏菌传播往往先在鼠类中流行，导致大批鼠类死亡，当病鼠死亡后，蜱将寄生宿主转向人类，并通过吸血的方式把鼠疫传给人类，从而造成人间鼠疫。20世纪90年代以来，鼠疫在全球范围内明显回升，人间病例迅速增多。

鼠疫的传统检测方法为“四步检测法”，此方法虽然能够检测鼠疫的流行状态，但是耗时长，操作繁琐，不能够给予及时准确的指导意见。因此，快速准确的检测鼠疫耶尔森氏菌具有重要意义。

随着分子生物学的飞速发展，荧光PCR的应用大大缩减的检测的时间和精力。而且实时荧光定量PCR是较为新型的利用分子生物学进行诊断的方法。PCR技术具有检测敏感性高，操作简单、快速等优点，然而其前期投入费用较大(对实验室功能分区以及PCR仪的依赖)，而且易受实验室污染而导致假阳性。所以，亟待建立一种快速、可靠的，适合基层单位和现场应用的鼠疫杆菌核酸检测技术。

发明内容

本发明的首要发明目的在于提出一种用于恒温扩增检测鼠疫杆菌的核酸序列。

本发明的第二发明目的在于提出一种用于恒温扩增检测鼠疫杆菌的试剂盒。

本发明的第三发明目的在于提出一种用于恒温扩增检测鼠疫杆菌的方法。

本发明的第四发明目的在于提出该核酸序列在检测鼠疫杆菌中的应用。

为了完成本发明的目的，采用的技术方案为：

本发明涉及一种用于恒温扩增检测鼠疫杆菌的核酸序列，所述核酸序列包含SEQID No.1和SEQ ID No.2所示的链置换引物序列、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的探针和SEQ ID No.5所示的交叉扩增引物序列。

优选的，SEQ ID No.3所示探针序列的5’端连接有荧光素，SEQ ID No.4所示探针序列的5’端连接有生物素。

本发明还涉及一种用于恒温扩增检测鼠疫杆菌的试剂盒，所述试剂盒包含恒温扩增试剂，所述恒温扩增试剂中含有SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的链置换引物序列、SEQID No.3和SEQ ID No.4所示的探针和SEQ ID No.5所示的交叉扩增引物序列。

优选的，SEQ ID No.3所示探针序列的5’端连接有荧光素，SEQ ID No.4所示探针序列的5’端连接有生物素。

优选的，SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示链置换引物的浓度均为0.1μM，SEQ IDNo.3和SEQ ID No.4所示的探针的浓度为0.3μM、SEQ ID No.5所示的交叉扩增引物的浓度为0.6μM。

优选的，所述恒温扩增试剂中还含有1×Bst Buffer、甜菜碱、MgSO4、dNTPs、BstDNA聚合酶；