[发明专利]用于新生儿糖原累积病基因分型的多重PCR引物系统及其用途

说明书

本发明揭示了一种用于检测新生儿糖原累积病基因分型的引物池，其特征在于，所述引物池包括用于特异性扩增新生儿糖原累积病相关基因靶向序列的若干个引物对；所述新生儿糖原累积病相关基因靶向序列选自PGM1、AGL、GBE1、GYG1、PGAM2、PHKA2、PHKA1、LDHA、PYGM、SLC37A4、GYS2、PFKM、PYGL、ALDOA、PHKG2、PHKB、ENO3、G6PC、GAA基因外显子区域序列中的至少一种待测片段。该试剂盒可以对糖原累积病作出精确的基因分型，用于研究和诊断由上述基因缺陷导致的糖原累积病。

技术领域

本发明属于基因分型和高通量筛选技术领域，具体涉及一种新生儿糖原累积病基因分型的精确检测方法及试剂盒与应用。

背景技术

糖原累积病是一类由于先天性酶缺陷所造成的糖原代谢障碍疾病，其中肝糖原累积症是糖原累积症较常见的类型，此类并多数属常染色体隐性遗传。由于糖原代谢酶的缺陷而导致糖原分解或合成障碍，从而产生不同组织器官中糖原或异型糖原的过多累积，主要受累的器官有肝、肾、肌肉、脑和小肠等。

糖原主要贮存在肝脏和肌肉中。正常情况下，糖原在肝脏中经过糖原磷酸化酶、糖原脱支酶、磷酸葡萄糖变位酶、葡萄糖-6-磷酸酶作用下，逐步降解为葡萄糖，提供血糖；在肌肉中，糖原降解产生葡萄糖-6-磷酸的不能水解成葡萄糖，只能进入酵解途径，进一步的代谢。

由不同的酶缺乏，导致糖原合成与代谢障碍，引起的糖原累积病类型也不同，相应的酶基因缺陷与对应的糖原累积病类型见表1。

表1：不同类型糖原累积病对应的基因

如何提供一种精确确定新生儿糖原累积病基因分型的方法，是一个急需解决的问题。

发明内容

本发明通过靶向扩增技术和高通量测序的方法，通过对PGM1、AGL、GBE1、GYG1、PGAM2、PHKA2、PHKA1、LDHA、PYGM、SLC37A4、GYS2、PFKM、PYGL、ALDOA、PHKG2、PHKB、ENO3、G6PC、GAA基因等19种疾病相关基因的外显子区域进行PCR富集扩增和测序，生物信息学分析可能存在的基因突变，从而对疾病的类型进行判断。

本发明的主要目的在于提供一种用于检测新生儿糖原累积病基因分型的引物池，其特征在于，所述引物池包括用于特异性扩增新生儿糖原累积病相关基因靶向序列的若干个引物对；所述新生儿糖原累积病相关基因靶向序列选自PGM1、AGL、GBE1、GYG1、PGAM2、PHKA2、PHKA1、LDHA、PYGM、SLC37A4、GYS2、PFKM、PYGL、ALDOA、PHKG2、PHKB、ENO3、G6PC、GAA基因外显子区域序列中的至少一种待测片段。

优选的技术方案中，所述引物池包括分别含有PGM1、AGL、GBE1、GYG1、PGAM2、PHKA2、PHKA1、LDHA、PYGM、SLC37A4、GYS2、PFKM、PYGL、ALDOA、PHKG2、PHKB、ENO3、G6PC、GAA基因的外显子区域序列中至少15个连续的核苷酸构成的连续核苷酸序列。

优选的技术方案中，所述特异性扩增PGM1基因靶向序列的引物包括SEQ No.ID 1-SEQ No.ID 36所示的连续核苷酸序列。