[发明专利]非小细胞肺癌靶向药物相关低频突变的多重富集检测方法

权利要求书

1.一种非小细胞肺癌靶向药物相关低频突变的多重富集检测试剂盒，其特征在于，包括：针对每个突变位点分别设计的引物、阻抑子和标记不同荧光的TaqMan探针；

以人类EGFR基因外显子19上的缺失突变中频率最高的2235_2249del-15，2236_2250del-15、外显子20上的T790M突变和外显子21上的 L858R突变这四个突变作为靶标；

EGFR基因外显子19特异性核酸序列如 SEQ ID No.1所示；

EGFR基因外显子20特异性核酸序列如 SEQ ID No.2所示；

EGFR基因外显子21特异性核酸序列如 SEQ ID No.3所示；

EGFR基因外显子19正向引物为引物1，EGFR基因外显子19反向引物为引物2，EGFR基因外显子20正向引物为引物3，EGFR基因外显子20反向引物为引物4，EGFR基因外显子21正向引物为引物5，EGFR基因外显子21反向引物为引物6；

引物1：5’TTCCCGTCGCTATCAARAC 3’；

引物2：5’ACAGCAAAGCAGAAACTCAC 3’；

引物3：5’CACCGTGCAGCTCATCAT 3’；

引物4：5’AGCAGGTACTGGGAGCCAAT 3’；

引物5：5’TCAAGATCACAGATTTTGGGCG 3’；

引物6：5’GGAAAATGCTGGCTGACCTA 3’；

EGFR基因外显子19对应的阻抑子序列如SEQ ID No.13所示；

EGFR基因外显子20对应的阻抑子序列如SEQ ID No.14所示；

EGFR基因外显子21对应的阻抑子序列如SEQ ID No.15所示；

EGFR基因外显子19对应的TaqMan探针为探针1，EGFR基因外显子20对应的TaqMan探针为探针2，EGFR基因外显子21对应的TaqMan探针为探针3，

探针1：5’ATCGAGGATTTCCTTGTTGGCTTT 3’；

探针2：5’TGTCTTTGTGTTCCCGGACATAGT 3’；

探针3：5’CCTCCTTACTTTGCCTCCTTC 3’。

2.根据权利要求1所述非小细胞肺癌靶向药物相关低频突变的多重富集检测试剂盒，其特征在于，外显子19的探针标记ROX荧光基团和BHQ2淬灭基团，外显子20的探针标记CY5荧光基团和BHQ3淬灭基团，外显子21的探针标记FAM荧光基团和BHQ1淬灭基团。

3.根据权利要求1所述非小细胞肺癌靶向药物相关低频突变的多重富集检测试剂盒，其特征在于，

还包括针对β-actin基因设计的β-actin引物与β-actin探针，

所述β-actin基因上的靶序列如SEQ ID No.4所示；

β-actin引物包括引物7与引物8，引物7为β-actin正向引物，引物8为β-actin反向引物，

引物7：5’CCAGCAGATGTGGATCAGCAAG 3’；

引物8：5’AGCATTTGCGGTGGACGAT 3’；

β-actin探针为探针4：5’AGGAGTATGACGAGTCCGGC 3’；

探针4在5’端标记HEX荧光基团，3’端标记BHQ1淬灭基团。