[发明专利]一株马德里毛壳菌及其应用

说明书

本发明属于微生物及其天然产物的应用技术领域，具体涉及一株马德里毛壳菌及其应用。本发明通过生物发酵方法，利用马德里毛壳菌来制备细胞松弛素类化合物，并将制备的细胞松弛素类化合物用于抗人肝癌HepG2、人非小细胞肺癌A549肿瘤药剂的制备，结果显示所述化合物对人非小细胞肺癌A549细胞、人体肝癌细胞HepG2均具有一定的抑制活性，具有较佳的应用效果，同时还能够诱导人非小细胞肺癌细胞凋亡，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于微生物及其天然产物的应用技术领域，具体涉及一株马德里毛壳菌及其应用。

背景技术

根据世界卫生组织的最新实况报道，肿瘤即癌症是世界第二大死因，恶性肿瘤是威胁人类健康的常见病和多发病，2018年全球新发恶性肿瘤病例约为1800万例，死亡病例高达960 万例。

微生物代谢产物由于化学结构多样、活性广泛的等特点，并且在细胞内能与多种特异性靶点相互作用，是发现靶向特定药物或药物先导化合物的重要来源之一。通过挖掘天然产物有效成分或者对其部分结构进行修饰，以寻找疗效更好、更适用的抗肿瘤药物的研发工作具有重大意义。

细胞松弛素是一类具有显著生物学功能的真菌多聚氨基酸杂合次级代谢产物，同时也是一种具有高度取代的异吲哚酮衍生物。其典型的结构特点具有一个三环骨架结构，其中一个大环骈和在异吲哚酮骨架上，根据骈和在聚酮骨架上氨基酸的类型不同，以及大环的类型、碳原子数、大环上取代基的不同决定了细胞松弛素的种类的丰富和结构的多样。研究发现，该类化合物具有广泛的抗肿瘤、抗菌、抗病毒等生物活性。

发明内容

本发明的目的是提供一株马德里毛壳菌，同时还提供了所述马德里毛壳菌在制备抗肿瘤药剂中的应用。

为实现上述目的，本发明所用的菌种为分离自新疆和田市地区的荒漠土壤中一株菌，其保藏的分类学名称为马德里毛壳菌Chaetomium madrasense CLC375，并保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2019年7月3日，保藏号为:CCTCC M 2019517。

本发明还提供了上述马德里毛壳菌在制备抗肿瘤药剂中的应用，应用时，通过生物发酵方法，利用马德里毛壳菌来制备细胞松弛素类化合物，所述细胞松弛素类化合物的结构式如下：

应用时，具体包括如下步骤：

(1)菌种活化：将马德里毛壳菌接种到SDAY平板培养基上，25～30℃下培养5d～7d，得到活化菌种；

(2)发酵培养：将步骤(1)中得到的活化菌种接种到大米固体培养基中，25℃静置培养28d 得发酵物；

(3)乙酸乙酯浸提：将步骤(2)得到的发酵物用乙酸乙酯浸提，浸提液减压浓缩并回收乙酸乙酯，得粗提物浸膏；

(4)粗提物柱层析分离：将步骤(3)得到的粗提物浸膏以二氯甲烷：甲醇体积比分别为100:1、 50:1、10:1、1:1进行梯度洗脱，经薄层层析检测，得到6个流份，并编号为Fr.1-Fr.6，再利用硅胶柱层析法或葡聚糖凝胶柱层析分离得到粗产物，并利用半制备反相高效液相法进行纯化，得到所述细胞松弛素类化合物。

具体的，步骤(2)中所述大米培养基的制备：取50-70g大米，100mL水，在121℃高压灭菌25-30min。

具体的，步骤(3)中所述乙酸乙酯浸提的过程如下：每份发酵物加入300mL乙酸乙酯，使用玻璃棒将发酵物搅拌成颗粒状，使溶剂与发酵物充分接触，放置12～16h过滤，三次浸提后，合并三次的浸提液，将浸提液减压浓缩得粗提物浸膏。

具体的，所述肿瘤是指人肝癌HepG2或人非小细胞肺癌A549，所述细胞松弛素类化合物在制备抗肿瘤药剂的同时，还能够诱导人非小细胞肺癌细胞凋亡。

本发明产生的有益效果是：