[发明专利]一种维生素B12的发酵法生产方法

权利要求书

1.一种维生素B12的发酵法生产方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

步骤1)制备谢氏丙酸杆菌液；

步骤2)制备悬浮发酵菌落；

步骤3)制备发酵培养基；

步骤4)混合悬浮发酵菌落与发酵培养基；

步骤5)厌氧发酵生产维生素B12；

步骤5)离心洗涤过滤悬浮载体；

步骤6)提取和纯化。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)制备谢氏丙酸杆菌液，包括如下步骤：将谢氏丙酸杆菌液接入菌液培养基中，培养至密度为(3-5)10⁸cfu/mL的菌液；所述菌液培养基的组分为:葡萄糖80g/L，酵母膏30g/L，玉米浆10g/L，磷酸二氢钾2g/L，磷酸氢二钾2g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，七水硫酸镁0.2g/L，生物素10mg/L，维生素B₁2mg/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)制备悬浮发酵菌落，包括如下步骤：将悬浮生物填料添加至所述的谢氏丙酸杆菌液中，让谢氏丙酸杆菌附着在所述的悬浮生物填料上，形成悬浮发酵菌落。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)制备发酵培养基，包括如下步骤：将玉米破碎，然后与淀粉按照2:3的质量比混合，再粉碎至粒径为50目，然后添加到4-5倍重量的水中，以200rpm的搅拌速度边搅拌边升温至60℃，保温条件下用100℃蒸汽处理10min，自然冷却至室温，即得培养液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括超声处理培养液，超声时间为20-60min，超声功率为500W。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，还包括酶处理，将培养液再调整温度为55℃，加硫酸调整pH为6，分别加入溶菌酶和酸性蛋白酶，溶菌酶的添加量为2万U:1L溶液，酸性蛋白酶的添加量为1万U:1L溶液，保温条件下，酶解12-24小时，然后过滤，收集滤过液，100℃灭酶5min，自然冷却至室温，再添加相同体积的水、适量乙酸钙和甘露醇，搅拌均匀，121℃蒸汽处理5min，自然冷却至室温，即得发酵培养基。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中混合悬浮发酵菌落与发酵培养基的过程为，将步骤2)中制得的混合悬浮发酵菌落按照5-10％的接种量接种至含有发酵培养基的发酵罐中，并进行搅拌混合；进行厌氧发酵，发酵温度为32-35℃,罐压为0.05MPa，发酵48-60小时得到发酵液混合物。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)中厌氧发酵生产维生素B12的过程为，将发酵液混合物输送到高速离心机中进行高速离心分离处理，将悬浮生物填料上的菌落分离出来，另外离心分离处理后过滤出悬浮生物填料。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤6)提取和纯化的过程，包括如下步骤:水解、树脂吸附、解析浓缩和结晶进行VB12的提取精制，获得维生素B12。

10.权利要求1-9任一所述的方法制得的维生素B12产品。