[发明专利]一种醒脑静注射液脑组织中冰片与麝香酮含量测定方法

说明书

本发明涉及一种脑组织中的冰片与麝香酮含量测定方法，所述方法，步骤如下：醒脑静给与哺乳动物体内，随后取脑，用生理盐水冲洗表面，然后用滤纸滤干，使用前放置在湿冰或5±3℃条件下，取脑后60分钟内，按一倍质量的脑加入1.5倍体积的生理盐水，匀浆得到脑匀浆，每495ul脑匀浆加入500μL含内标奈的溶液和，充分涡旋，放入‑20±5℃冰箱过夜萃取，室温融化，充分涡旋，在4℃，20000g离心条件下离心20分钟，取250μL上清，过滤后，注入气质联用色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用标准曲线法计算大鼠脑组织中冰片与麝香酮的含量。

技术领域

本发明涉及药物有效成分的检测方法，具体涉及将醒脑静注射液注入体内后检测脑组织中冰片与麝香酮含量的方法。

背景技术

醒脑静注射液是由麝香、冰片、郁金和栀子经水蒸气蒸馏提取精制而成的复方中药注射液，始创于上世纪70年代，组方由中医名方安宫牛黄丸化裁而得，具有清热解毒，凉血活血，开窍醒脑功效。为阐明醒脑静作用机制并找到控制质量的关键指标，制定更科学更合理的质量内控标准，生产更加优质而有竞争力的醒脑静注射剂，为大幅度拓展国内市场并力争推向国际奠定坚实的基础，需开展物质基础的研究工作。

已有的醒脑静注射液质量控制的文献报道，全部是以麝香酮和冰片为质控指标，检测方法主要为气相色谱法(GC)和气质联用法(GC-MS)，但未有脑组织中麝香酮和冰片的测定方法，缺乏有效成分在脑组织中的检测手段，为了确定有效成分在脑组织中的变化情况，需要开发一种准确可靠的检测技术，为阐明醒脑静注射液的药效物质基础提供科学依据。

发明内容

本发明的目的在于提供一种醒脑静注射液脑组织中冰片与麝香酮含量测定方法。

本发明通过对醒脑静注射液脑组织中冰片与麝香酮含量研究，提供了醒脑静注射液脑组织中冰片与麝香酮含量测定方法，弥补了现有体内醒脑静注射液药效活性物质研究的不足的缺点，使醒脑静注射液后期物质基础研究手段更为完善，也更为科学。

一种醒脑静注射液在脑组织中的冰片与麝香酮含量测定方法，采用气质联用色谱法，所述方法，步骤如下：

醒脑静给与哺乳动物体内，随后取脑，取脑后60分钟内，加入生理盐水，匀浆得到脑匀浆，加入含萘的内标溶液，充分涡旋，放入-20±5℃冰箱过夜萃取，室温融化，充分涡旋，离心，取上清，过滤后，注入气质联用色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用标准曲线法计算大鼠脑组织中冰片与麝香酮的含量。

优选的，本发明的方法，步骤如下：醒脑静给与哺乳动物体内，随后取脑，用生理盐水冲洗表面，然后用滤纸滤干，使用前放置在湿冰或5±3℃条件下，取脑后60分钟内，按一倍质量的脑加入1.5倍体积的生理盐水，匀浆得到脑匀浆，每495ml脑匀浆加入500μL含内标萘的溶液，充分涡旋，放入-20±5℃冰箱过夜萃取，室温融化，充分涡旋，在4℃，20000g离心条件下离心20分钟，取250μL上清，过滤后，注入气质联用色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用标准曲线法计算大鼠脑组织中冰片与麝香酮的含量；其中所述气质联用色谱仪采用以下色谱条件：

气质联用色谱仪色谱系统条件：气相色谱：安捷伦7890A，色谱柱：岛津Rtx-Wax，30m，0.25ID，0.25um(RT-12423)，程序升温条件：初始温度150℃，15℃/min 升温至250℃，维持5min。进样口温度：250℃，载气：高纯氦气，流速：2mL/min，压力：19.4psi，自动进样器：安捷伦7693；

自动进样器温度：室温，

保留时间：待测物 内标

冰片＝～5.3分钟 萘＝～5.6分钟

麝香酮＝～9.2分钟

运行时间：12.83min

进样量：1μL