[发明专利]一种组织学切片染色方法

说明书

本发明提供一种HE染色方法，包括(1)将生物组织切片、烘干、脱蜡，梯度酒精水化至水；(2)采用天青石蓝溶液浸泡；(3)采用苏木素染液染色；(4)水流冲洗至蓝化；(5)梯度酒精脱水；(6)采用伊红染液染色；(7)采用二甲苯透明；(8)封片。本发明苏木素染液体系中添加了乙酸，且苏木素染色经蓝化后，直接进行脱水步骤，至100％酒精后进行伊红染色，50％的醇溶液中滴加适量乙酸。通过该步骤创新，伊红染色调整到脱水步骤之后，保证脱水的梯度酒精无污染，使梯度酒精循环使用次数显著增加，大大降低了实验成本。并且调整后伊红染液的染色时间大幅度缩短，缩短了染色周期,染色的质量显著提高。

技术领域

本发明涉及医学生物形态学研究领域，具体涉及一种组织学染色方法，即苏木素伊红染色方法，简称HE染色。

背景技术

HE染色技术目前是医学生物学领域应用最广泛的组织学染色方法，H指苏木精(hemaltoxylm)，E指伊红(Eosin)。染料的摄取常常是由于染料和组织之间的亲和力不同，而选择性的着色。亲和力受多种因素影响，如库伦引力，范德华力、氢键等，他们在时间和空间上影响着色效果。

一般来说，苏木素将细胞核染成蓝黑色，而伊红将细胞质和大多数结缔组织纤维染成不同程度的红色。

苏木素是由洋苏木(苏木素树的树心)经热水，尿素等工艺流程提炼而得，苏木素本身并不是一种染料，其主要氧化产物苏木红是一种天然染料，是该染料发挥功能的主要成分。

苏木红可由苏木素通过自然氧化和化学氧化两种方法获得。自然氧化获得的苏木素染液染色能力可维持较长时间，但由于其生产周期长，在生物学领域应用较少。苏木素中功能成分苏木红是阴离子，若无媒介染剂，其对核的染色不会很充分，对组织的亲和力也较弱，因此根据苏木素中添加的媒染剂的不同，可分为：明矾苏木素、铁苏木素、钨苏木素、钼苏木素、铅苏木素和无媒染剂的苏木素。常规苏木素染液有Ehrlich、Mayer、Harris、Gill、Delafield和Cole，其中最常使用的是Mayer苏木素。

伊红属于夹氧杂蒽类染料，市场上可见的伊红种类较多，但伊红Y实用最广泛。作为胞浆染料，最常与苏木素联用来显示常见的组织结构。

HE染色的染色步骤分为两步，第一步为苏木素染色，第二部为伊红染色。其中苏木素染色根据苏木素种类的不同，可分为进行性染色和退行性染色。进行性染色是一次性达到核的着色效果，退行性染色是指先将组织切片过度染色，接着用酸性酒精分化，最后再反蓝。伊红的独特之处在于：适当分化后能染成不同程度的深浅不一的粉红至红色，便于区分不同类型的细胞的胞浆以及不同类型的结缔组织和基质。

医学及生物学实验中，获取目的组织后，大都选择在福尔马林或布氏固定液中固定，然后实用酒精保存。对于某种特定的物质而言，其在不同的固定剂中的保存程度通常不同，比如酒精对组织中蛋白质的保存能力较差，而且在保存抗原及酶的活性方面也较差；许多脂类在四氧化锇或重铬酸盐中固定后保存完好，而在福尔马林中固定保存较差，在丙酮或酒精中固定过程中被吸除，因此酒精固定后，脂类无法染色。因此增加了后续染色的难度，对提高HE图片的质量有了更高的挑战。

HE染色的核心是染液的选择，而染色效果主要取决于染色时间，在组织没有物理损伤的前提下，观察对照组和处理组之间的异同。尽管苏木素和伊红苏染液种类繁多，但是从它们的配方过程不难发现，二者不仅能溶于水，也易溶于醇溶液。HE染色过程中样品接触的主要溶液是水和不同梯度的酒精溶液，弱碱性水对某些苏木素染液有“反蓝作用”，如明矾苏木素，Carzzzi苏木素。而Mayer苏木素既可以用于进行性染色也可用于退行性染色，尤其是当需要核复染以突出特殊染色后的胞浆成分时，不需要水化，以免破坏或褪去胞浆成分的着色，Carzzzi苏木素也可用于进行性核复染，但是需要在自来水中蓝化。