[发明专利]一种胺脱氢酶突变体及其在手性胺和氨基醇合成中的应用

权利要求书

1.一种胺脱氢酶突变体，其特征在于，其是由下述任一氨基酸序列组成的蛋白质：

(1)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第78位赖氨酸替换为丝氨酸，第276位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(2)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第78位赖氨酸替换为丝氨酸，第276位的天冬酰胺替换为半胱氨酸；

(3)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第78位赖氨酸替换为丝氨酸，第276位的天冬酰胺替换为苏氨酸；

(4)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第78位赖氨酸替换为苏氨酸，第276位的天冬酰胺替换为半胱氨酸；

(5)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第78位赖氨酸替换为苏氨酸，第276位的天冬酰胺替换为亮氨酸。

2.一种核酸，其特征在于，编码如权利要求1所述的胺脱氢酶突变体。

3.一种重组表达载体，其特征在于，包含如权利要求2所述的核酸。

4.一种重组表达转化体，其特征在于，包含如权利要求3所述的重组表达载体。

5.一种重组胺脱氢酶突变体催化剂，其特征在于，是以下形式中的任意一种：

(1)培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离含有所述胺脱氢酶突变体的转化体细胞；

(2)培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离含有所述胺脱氢酶突变体的转化体细胞，对含有所述胺脱氢酶突变体的转化体细胞进行破碎，获得的细胞破碎液；

(3)培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离含有所述胺脱氢酶突变体的转化体细胞，对含有所述胺脱氢酶突变体的转化体细胞进行破碎，获得的细胞破碎液，将所述胺脱氢酶突变体的细胞破碎液经冷冻干燥而得到的冻干酶粉。

6.一种如权利要求1所述胺脱氢酶突变体或如权利要求5所述重组胺脱氢酶突变体催化剂在催化潜手性羰基化合物和邻位羟基酮类化合物不对称还原制备(R)-手性胺或手性氨基醇中的应用。

7.如权利要求6所述应用，其特征在于，所述潜手性羰基化合物的结构如下1-12所示，所述邻位羟基酮类化合物的结构如下13-16所示：

8.如权利要求6所述应用，其特征在于，所述胺脱氢酶突变体或所述重组胺脱氢酶突变体催化剂催化潜手性羰基化合物和邻位羟基酮类化合物不对称还原反应的氨基供体为氨水。

9.如权利要求6所述应用，其特征在于，所述胺脱氢酶突变体或所述重组胺脱氢酶突变体催化剂催化潜手性羰基化合物和邻位羟基酮类化合物不对称还原反应需要辅酶NADH的参与，反应过程中辅酶NADH被氧化为NAD⁺。

10.如权利要求9所述应用，其特征在于，通过与葡萄糖脱氢酶催化的葡萄糖氧化反应进行反应耦联，以葡萄糖作为辅底物，实现辅酶NADH的原位再生；

或者，通过与甲酸脱氢酶催化的甲酸氧化反应进行反应耦联，以甲酸作为辅底物，实现辅酶NADH的原位再生。