[发明专利]一种检测PON1基因SNP位点的引物组、引物组的设计方法及其应用

权利要求书

1.一种引物组的设计方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)以野生型基因为模板，设计扩增SNP位点的上游引物，所述SNP位点位于上游引物的3’端；

(2)在所述上游引物的靠近3’端SNP位点的非SNP位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；

(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述引物组。

2.根据权利要求1所述的设计方法，其特征在于，所述rs705380-126C>G位点的引物组的设计方法包括以下步骤：

(1)以野生型PON1基因为模板，设计扩增rs705380-126C>G位点的上游引物，所述rs705380-126C>G位点位于上游引物的3’端；

(2)在所述上游引物的靠近3’端rs705380-126C>G位点的非rs705380-126C>G位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型PON1基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；

(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述rs705380-126C>G位点的引物组。

3.根据权利要求1所述的设计方法，其特征在于，所述rs85457295325384C>G位点的引物组的设计方法包括以下步骤：

(1)以野生型PON1基因为模板，设计扩增rs854572 95325384C>G位点的上游引物，所述rs854572 95325384C>G位点位于上游引物的3’端；

(2)在所述上游引物的靠近3’端rs854572 95325384C>G位点的非rs85457295325384C>G位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型PON1基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；

(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述rs854572 95325384C>G位点的引物组。

4.一种检测SNP位点的引物组，其特征在于，所述引物组采用如权利要求1-3任一项所述的方法设计得到。

5.根据权利要求4所述的引物组，其特征在于，所述引物组包括针对rs705380-126C>G位点的引物组和/或针对rs854572 95325384C>G位点的引物组；

其中，针对rs705380-126C>G位点的上游引物如SEQ ID NO:1所示，针对rs85457295325384C>G位点的上游引物如SEQ ID NO:3所示。

6.根据权利要求5所述的引物组，其特征在于，针对rs705380-126C>G位点的下游引物如SEQ ID NO:2所示，针对rs854572 95325384C>G位点的下游引物如SEQ ID NO:4所示。

7.一种SNP位点检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求4-6任一项所述的引物组；

优选地，所述试剂盒还包括Mg²⁺缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和去离子水；

优选地，所述试剂盒还包括阳性对照和/或阴性对照；

优选地，所述阳性对照为野生型质粒和/或突变型质粒；

优选地，所述突变型质粒同时含有至少两个SNP位点、优选为同时含有rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点；

优选地，所述野生型质粒的核酸序列如SEQ ID NO:5所示；

优选地，所述突变型质粒的核酸序列为SEQ ID NO:6所示；

优选地，所述阴性对照为去离子水。