[发明专利]CRE菌株碳青霉烯酶检测方法的性能评估方法

权利要求书

1.CRE菌株碳青霉烯酶检测方法的性能评估方法，其特征在于，包括以下步骤；

步骤1：VITEK2鉴定的亚胺培南耐药菌株复苏后用加热煮沸法提取DNA模板，检测5个碳青霉烯酶基因，PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳仪上进行电泳确认；

步骤2：改良Hodge试验以厄他培南为检测底物，检测菌株划线与大肠埃希菌抑菌环交叉处细菌有增强生长的趋势判为阳性，即产碳青霉烯酶；

步骤3：mCIM和eCIM：取2管2mL TSB肉汤，一管为mCIM试验管，另一管加入20μL 0.5mol/L EDTA溶液作为eCIM试验管，用1μL接种环刮取满环血平板上过夜培养的受试菌菌株，分别加入上述2管TSB肉汤中(mCIM管和eCIM管)，震荡混匀；得到得到2管含有受试菌的菌液；

步骤4：将美罗培南纸片(10μg)浸入菌液中；

步骤5：制备0.5麦氏浊度单位大肠埃希菌ATCC 25922菌悬液并均匀涂布M-H琼脂平板，干燥；

步骤6：用10μL接种环将步骤4得到的美罗培南纸片取出并挤去多余菌液，贴至上述M-H琼脂板上，同一受试菌mCIM和eCIM试验管中的美罗培南纸片贴于同一M-H平板，温育，量取抑菌圈直径；

步骤7：mCIM结果判断：

碳青霉烯酶阳性：美罗培南抑菌圈直径为6-15mm或直径为16-18mm但抑菌圈内有散在菌落；碳青霉烯酶阴性：抑菌圈直径≥19mm；碳青霉烯酶中性：抑菌圈直径为16-18mm，或直径为≥19mm但抑菌圈内有散在菌落；

eCIM结果判断：金属酶阳性：与mCIM结果相比，美罗培南抑菌圈直径≥5mm(如mCIM＝6mm，eCIM＝15mm，抑菌圈直径之差为9mm)；金属酶阴性：与mCIM结果相比，美罗培南抑菌圈直径≤4mm(如mCIM＝6mm，eCIM＝8mm，抑菌圈直径之差为2mm)。

2.根据权利要求1所述的CRE菌株碳青霉烯酶检测方法的性能评估方法，其特征在于，所述的EDTA溶液终浓度为5mmol/L。

3.根据权利要求1所述的CRE菌株碳青霉烯酶检测方法的性能评估方法，其特征在于，所述的步骤4中将美罗培南纸片浸入菌液中，35℃温育4h。

4.根据权利要求1所述的CRE菌株碳青霉烯酶检测方法的性能评估方法，其特征在于，所述的步骤5中干燥3～10min。

5.根据权利要求1所述的CRE菌株碳青霉烯酶检测方法的性能评估方法，其特征在于，所述的步骤6中35℃温育18～24h。