[发明专利]一种测定药物与铜离子络合能力的方法

说明书

发明人提供了一种测定药物与铜离子络合能力的方法，包括以下步骤：将100μl待测药物和100μl 0.1mmol/L‑10mmol/L铜离子溶液混合、搅拌均匀，静置1‑5min，加入2ml浓度为0.1mmol/L‑5mmol/L罗丹明B酰肼溶液中，反应3‑10min，得到待测液。上述技术方案，将铜离子与待测药物预先混合后，再加入到罗丹明B酰肼的溶液中。如果待测药物与铜离子能够络合，与罗丹明B酰肼形成铜离子竞争，使得开环的罗丹明B酰肼数量减小，最后导致产生的粉红色变浅，紫外吸收和荧光发射的强度都下降，这些信号的变化就体现了药物与铜离子的络合能力。

技术领域

本发明涉及一种检测方法，特别涉及一种测定药物与铜离子络合能力的方法。

背景技术

虽然土壤对污染物有一定的自净能力,但当有害物质超过土壤环境容量时会造成土壤及其相关生态系统受到影响和破坏,目前国内外对土壤中重金属污染及其影响因素已进行了广泛的研究,铜作为一种植物必须的微量元素,高浓度会对植物产生毒性,其毒性的大小主要取决于游离态铜离子的活性而不是铜元素的总量.由于金属离子自身具有一定数量的正电荷,易与带负电基团的可溶性有机物结合,两者的结合过程将改变金属离子与土壤之间的吸附平衡,影响金属离子在土壤中的形态和在土壤圈中的移动性乃至生物可利用性。研究不同性质的物质(药物)对铜离子的络合作用对进一步明确铜离子等重金属离子在环境中的形态、行为有一定参考作用。

铜是机体很多酶的活性成分，是机体代谢的媒介；铜能够影响铁的代谢，间接地参与造血；铜还在骨骼与结缔组织的形成以及血管的健康当中扮演着重要角色。在机体内，铜的含量须处于一种平衡的状态，过多或过少，都会引发机体的一系列病变。当机体处于铜缺乏状况下，会造成组织的缺氧、内分泌的失调、发育的迟缓以及免疫力低下等。反之，当机体铜过载，同样会诱发多种疾病，例如：老年痴呆、威尔森病、帕金森氏症、朊病毒疾病以及门克斯病等。食物或药物能够和铜离子形成络合物，从而干扰人体内的游离铜离子的含量，从而起到预防和治疗疾病的目的，因此开发一种筛选药物与铜离子络合能力的方法具有十分重要的意义。

目前测定药物与铜离子络合能力的方法有以下几种，但都有一定缺陷。比如，pH滴定试验，对于含有大量酸性基团的配位体,比如腐植酸和黄腐酸在络合物形成过程中有几个氢离子被置换出来,通常伴随着溶液pH值的降低,并常常以此作为络合物形成的一种定性指示，但这种方法不够直观，而且只有药物含有大量酸性基团时才可使用。再比如，AOAC方法，原理是多次调节溶液的pH碱性，使游离的金属离子形氢氧化物沉淀，将沉淀离心分离，清液中的金属离子含量即为络合金属量，这种方法既要分离游离的金属离子，又要测定络合金属离子含量，一般需要用到原子吸收等较昂贵，操作较复杂的仪器。再比如，原子吸收/发射光谱法、电感耦合法、电化学法(电解分析法)等仪器分析方法，所用的设备比较复杂，而且其在检测铜时，无法区分游离态与结合态铜离子。

发明内容

为此，需要提供一种简单易行，可用肉眼直接观察到药物与铜离子络合能力，同时又可以定量检测的方法。为实现上述目的，发明人提供了一种测定药物与铜离子络合能力的方法，包括以下步骤：

将100μl待测药物和100μl 0.1mmol/L-10mmol/L铜离子溶液混合、搅拌均匀，静置1-5min，加入2ml浓度为0.1mmol/L-5mmol/L罗丹明B酰肼溶液中，反应3-10min，得到待测液；

肉眼观测待测液的变色情况；

和/或检测待测液的紫外吸光度，当待测液的OD值高于0.2时，将所测吸光度与阳性对照和/或阴性对照进行对比，得出待测药物与铜离子的络合能力；

当待测液的OD值低于或等于0.2时，则检测待测液的荧光强度,并与阳性对照和/或阴性对照进行对比，得出待测药物与铜离子的络合能力。