[发明专利]一种检测胎儿弯曲菌龟亚种的PCR试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测胎儿弯曲菌龟亚种的PCR试剂盒。本发明所述的检测胎儿弯曲菌龟亚种的PCR试剂盒包括：以胎儿弯曲菌龟亚种的COA基因作为靶基因设计的正向引物和反向引物。本发明所述的试剂盒不仅可以检测龟亚种，还可用来区分龟亚种和胎儿亚种、性病亚种。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种PCR检测试剂盒，特别是涉及一种检测胎儿弯曲菌龟亚种的PCR试剂盒。

背景技术

弯曲菌属是一类革兰氏阴性，氧化酶触酶阳性，呈S形、或螺旋状弯曲，单极或双极鞭毛、嗜微需氧生长的人兽共患传染病病原体。弯曲菌常定居于温血动物(如家禽、野鸟)的肠道内，以“粪-口传播”的方式传染给人类，主要引起一种“痢疾样”急性腹泻性疾病。而胎儿弯曲菌(Campylobacter fetus)可导致人体肠道外感染如早产、菌血症、腹膜炎、脑膜炎、关节炎等。胎儿弯曲菌按照宿主的不同及所致疾病的差异可分为三个亚种：胎儿亚种、性病亚种和龟亚种。胎儿亚种来源于牛羊及鸟类，可导致牛羊早产，但症状较轻；性病亚种主要来源于牛，可导致牛羊流产、生殖道炎症；龟亚种来源于爬行动物并具有独特的分子特征，因此对亚种的准确鉴定可以推测其感染的来源，为流行病学调查提供依据。

胎儿弯曲菌三个亚种之间的生化反应差异较小：1％甘氨酸生长实验性病亚种为阳性，而胎儿亚种和龟亚种为阴性，目前不能根据生化试验将其三个亚种之间进行区分。文献报道使用多重PCR鉴别胎儿亚种和性病亚种的原理为扩增针对胎儿弯曲菌CstA基因和针对性病亚种的Par基因，如果扩增出现960bp片段和140bp片段则为性病亚种，如果仅有960bp为胎儿亚种。但是对龟亚种目前仅能通过对16S RNA测序然后在Genbank数据库中比对，以及通过MALDI-TOF MS取得峰图跟标准菌株比对后确定是否为龟亚种，但目前尚没有对龟亚种的普通PCR鉴定方法。

本申请人在2014年8月29日已申请发明专利“一种快速鉴别胎儿弯曲菌和性病亚种的方法和试剂盒”(专利号：CN201410437158.5)。该专利涉及的试剂盒仅能鉴别胎儿弯曲菌和性病亚种，检测的是胎儿弯曲菌的sap保守基因和性病亚种的par基因，而不能对龟亚种进行检测。当时尚未有国际权威期刊对龟亚种的定义。目前对胎儿弯曲菌龟亚种没有通过核酸的快速检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测胎儿弯曲菌龟亚种的PCR试剂盒。

本发明所述的检测胎儿弯曲菌龟亚种的PCR试剂盒包括：以胎儿弯曲菌龟亚种的COA基因作为靶基因设计的正向引物和反向引物。

根据本发明所述的检测胎儿弯曲菌龟亚种的PCR试剂盒的进一步特征，所述以COA基因为靶基因设计的正向引物的序列为SEQ ID NO.1，反向引物的序列为SEQ ID NO.2。

本发明所述的检测胎儿弯曲菌龟亚种的PCR试剂盒是用于检测龟亚种的COA基因，此基因在胎儿亚种和性病亚种均不存在，因此本发明所述的试剂盒不仅可以检测龟亚种，还可用来区分龟亚种和胎儿亚种、性病亚种。

附图说明

图1是本发明所述的PCR试剂盒的PCR产物电泳图，泳道1-7分别为1:10-1:10⁶稀释度的PCR产物。

图2是本发明所述的PCR试剂盒的特异性实验PCR产物电泳图。

具体实施方式

以下通过具体实施例并结合附图对本发明进行详细说明。

1.引物设计

选择胎儿弯曲菌龟亚种的COA基因作为靶基因，设计PCT扩增引物(见表1)。

表1：扩增COA基因的引物序列