[发明专利]一种评估珊瑚耐热性的方法

权利要求书

1.一种评估珊瑚耐热性的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

步骤1：选择生长状态良好的健康珊瑚作为样本，珊瑚缸设置为强光的寡营养条件，定期检测水质，待水质均达到适合珊瑚生长条件，即可进行下一步骤；

步骤2：将珊瑚样品放入珊瑚缸，采用梯度升温的方式缓慢升温，根据不同种珊瑚选取亚致死或致死温度为胁迫温度，胁迫时间设置为2-3d；

步骤3：测定珊瑚样品的最大光量子产量并记录；

步骤4：用0.22微孔滤膜过滤海水冲洗部分珊瑚组织，取冲洗液离心后，取离心液上清保存在-80℃超低温冰箱，用于超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和天冬氨酸蛋白水解酶活性测定；

步骤5：继续冲洗珊瑚组织，用300目的网筛过滤冲洗液，将滤液离心，反复镜检离心至虫黄藻干净后4％甲醛固定用于后期计数，珊瑚骨骼置于鼓风干燥箱干燥，用于后期虫黄藻计数；

步骤6：测定超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和天冬氨酸蛋白水解酶的活性，虫黄藻的计数，根据超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和天冬氨酸蛋白水解酶的活性、虫黄藻的计数和最大光量子产量评估珊瑚的耐热性。

2.根据权利要求1所述的一种评估珊瑚耐热性的方法，其特征在于：所述步骤1中，强光的寡营养条件为：T:26℃、KH:7.0±0.3、pH:8.2±0.1、Ca²⁺:400±15ppm、Mg²⁺:1400±20ppm、PO₄^3-<0.03ppm、NH₄⁺<0.15ppm、NO₂^-<0.1ppm、NO₃^-≈0ppm，设置12/12h光照，采用250W金属卤素灯+4T5HO。

3.根据权利要求1所述的一种评估珊瑚耐热性的方法，其特征在于：所述步骤2中，胁迫温度为34℃，梯度升温的方式为12h升高1℃，升高至目标温度后驯化3天。

4.根据权利要求1所述的一种评估珊瑚耐热性的方法，其特征在于：所述步骤4中，冲洗液不超过10ml，选取冲洗液于4℃，1500g离心15min。

5.根据权利要求1所述的一种评估珊瑚耐热性的方法，其特征在于：所述步骤5中，滤液取50ml 4000g 4℃低温离心10min。

6.根据权利要求1所述的一种评估珊瑚耐热性的方法，其特征在于：所述步骤6中测定超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和天冬氨酸蛋白水解酶的活性的具体过程为：超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性采用南京建成总超氧化物歧化酶(T-SOD)测试盒，和过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒，分别采用使用羟胺法和可见光法进行测定，蛋白质浓度采用生工生物BCA蛋白质定量检测试剂盒进行测定，天冬氨酸蛋白水解酶活性测定采用凯基生物Caspase-3分光光度法检测试剂盒。

7.根据权利要求1所述的一种评估珊瑚耐热性的方法，其特征在于：所述步骤6中虫黄藻的计数的具体过程为：用血球计数板在显微镜下计数共生藻密度(个/ml)，珊瑚表面共生藻密度用以下公式计算：D＝(C/90％*V)/(M/G)，式中：V：冲洗液体积，C：共生藻浓度，90％：固定液中原液比例，M：包裹在珊瑚样品外的该铝箔重量，G：铝箔单位面积重量，铝铂纸的密度一定,铝铂纸的面积与重量成正比,通过测量包裹在珊瑚表面铝铂纸的重量而间接估算珊瑚的表面积。

8.根据权利要求1所述的一种评估珊瑚耐热性的方法，其特征在于：所述步骤6中，分析造礁石珊瑚表型特征，共生虫黄藻密度，光合速率，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、和天冬氨酸蛋白水解酶的活性，根据上述分析所测数据的波动幅度准确判断珊瑚的耐热性，评估同种珊瑚驯化前后的耐热性，同时评估不同种珊瑚驯化的效果。