[发明专利]一种体外培养结核感染T细胞的方法

权利要求书

1.一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：

第一步：采集外周静脉新鲜全血，将采集的全血与抗凝剂颠倒混匀，使抗凝剂充分溶解；

第二步：离心，去除上层血浆，保留细胞层；

第三步，在血细胞中加入血浆等体积的无内毒素无血清培养基液1，充分混匀，离心，吸走上层的无内毒素无血清培养基液1；

第四步：在分离后的血细胞中加入血浆等体积的无内毒素无血清培养基液2，充分混匀；

第五步：按空白对照管N、测试管T和阳性对照管P的顺序，在3种培养管中分别加入1mL含有无内毒素无血清培养基液2血细胞样本，使培养管内物质充分混匀；

第六步：将加有无内毒素无血清培养基液2血细胞样本的3种培养管直立放入恒温培养箱中培养；

第七步：培养结束后，将培养管离心，取上层无内毒素无血清培养基液2检测各培养管中γ-干扰素的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于，所述抗凝剂为肝素钠或肝素锂。

3.根据权利要求1所述的一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于，所述无内毒素无血清培养基液1的主要成分为无机盐、氨基酸、维生素的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于，所述无内毒素无血清培养基液2的主要组分为无机盐、氨基酸、维生素及细胞因子。

5.根据权利要求1所述的一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于，所述恒温培养箱的培养温度为37±1℃。

6.根据权利要求1所述的一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于，所述培养管在恒温培养箱的培养时间为16～24小时。

7.根据权利要求3或4所述的一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于，所述无机盐包含但不限于以下几种：硝酸钙、无水硫酸镁、无水磷酸二氢钠、氯化钾、氯化钠、碳酸氢钠。

8.根据权利要求3或4所述的一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于，所述氨基酸包含但不限于以下几种：L-精氨酸、L-门冬酰胺、L-门冬氨酸、L-胱氨酸二盐酸盐、L-谷氨酸、甘氨酸、L-组氨酸、L-羟脯氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、L-谷氨酰胺。

9.根据权利要求3或4所述的一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于，所述维生素包含但不限于以下几种：生物素、D-泛酸钙、叶酸、i-肌醇、烟酰胺、盐酸吡哆醇、核黄素、氯化胆碱、盐酸硫胺素、维生素B12、对氨基苯甲酸。

10.根据权利要求4所述的一种体外培养结核感染T细胞的方法，其特征在于，所述生长因子包括以下一种或几种：成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子、表皮生长因子、神经生长因子、血小板衍生生长因子和转化生长因子。