[发明专利]脾氨肽口服冻干粉活力快速测定方法

权利要求书

1.脾氨肽口服冻干粉活力快速测定方法，其特征在于，

（1）取小鼠3-5只，雌雄均可，雌鼠无孕，体表消毒后放净化工作台内，无菌操作取出脾脏，在灭菌平皿内置于灭菌尼龙网袋中，加适量RPMI-1640液，用灭菌针芯研磨后吸集于灭菌小试管中，将脾细胞悬液缓缓重层于淋巴细胞分离液上面，在水平离心机上于20秒内使离心力达2000r/min，离心20min，吸取淋巴细胞层，用适量1640培养液悬浮，1500r/min，离心5min，如此洗2次，计数淋巴细胞，并用1640培养液调整浓度为3×106/ml-5×106/ml备用；

（2）样品2mg/ml ：脾氨肽口服冻干粉1支，加1640培养液制成含多肽2mg/ml 溶液；

（3）取灭菌的96孔细胞培养板，每份样品设至少三个实验孔和三个对照孔，按下表操作：

（4）将培养板置CO₂培养箱中，在37℃、5%CO₂及饱和湿度条件下培养2.5小时；

（5）弃去培养板内液体，每孔加MTT应用液200ul，在上述CO₂培养箱中培养4小时，将培养板在微量板离心机上离心，离心机转速1000r/min，离心15min，然后弃去孔内培养液；

（6）每孔加入二甲基亚砜150ul，用微量混振器振荡3min，使其充分溶解，室温放置5min；

（7）选择490nm波长，在酶联检测仪上测定各孔A值，记录结果，按下式计算粘附抑制指数：

。

2.根据权利要求1所述的脾氨肽口服冻干粉活力快速测定方法，其特征在于，取体重22-25g的小鼠3-5只，小鼠体表采用75%的酒精消毒后放净化工作台内。