[发明专利]TMB肿瘤突变符合标准品及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种TMB肿瘤突变符合标准品及其制备方法和应用，所述方法包括如下步骤：采用不同的方法分析对应的TMB值，寻找出对应的方法；采用所述对应的方法，在ATCC或者CLS选择配对细胞，一个是肿瘤细胞，一个是对应的正常细胞，作为分析对象；分别采用WES和Panel的方法检测目的细胞系的突变，计算出对应的TMB值，记为X、Y；计算相关性R²，确定出TMB分析方法，检测方法的标准；优化出样品的TMB值的标准。本发明的TMB肿瘤突变符合标准品的制备方法，采用ATCC的配对细胞作为标准分析样品，性能稳定，可重复再生；兼顾完整性、准确性和市场需求，具有很好的商业前景。

技术领域

本发明涉及一种TMB肿瘤突变符合标准品及其制备方法和应用。

背景技术

在过去的数年，免疫检查点抑制剂在肿瘤免疫治疗上展示出优秀的数据，其疗效显著优于一线化疗，与此同时，肿瘤突变符合TMB作为一个潜在的生物标志物而出现。在不同的癌症中体细胞突变的数量从0.01突变/Mbp到超过400突变/Mbp不等，这些突变中有些会转录表达多肽抗原表位或肿瘤新抗原，对于TMB的分析，一般是采用全外显子WES测序方法对肿瘤DNA和对照的胚系DNA进行分析，同时基于WES和Panel的一致性，采用Panel测序方法对肿瘤DNA和对照胚系DNA进行分析也是现在的趋势，另外随着液体活检技术的进度，也有很多公司在研究bTMB的价值。

欧洲临床肿瘤学会ESMO和ESMO亚洲已经在指南中纳入TMB作为可能的生物标志物，对于TMB高(>10突变/Mbp)的患者，建议将ipilimumab联合Nivolumab作为一线治疗方案。但是在评估OS方面，TMB尚未足够的证据以支撑其作为可靠的生物标志物，在突变发现方面也还没有相应的标准，在不同肿瘤类型或免疫疗法中分析方法和TMB阈值的差异，还有不同算法也会影响TMB的预测值等等，都让该生物标志物变得扑朔迷离。

因此TMB是否准备好了在临床中用于NSCLC的辅助诊断吗？基于现在的证据，显然是不行的。在正式将TMB作为可靠的生物标志物之前，还有许多工作需要做。其中肿瘤突变负荷TMB的标准化是非常重要的事，市场亟待对应的标准品上市，帮助标准化TMB的分析。

发明内容

本发明的一个目的在于提出一种TMB肿瘤突变符合标准品的制备方法。

本发明的一种TMB肿瘤突变符合标准品的制备方法，包括如下步骤：S101：根据临床试验的数据，收集TCGA的数据，采用不同的方法分析对应的TMB值，寻找出对应的方法，达到与临床比较相符的结论；S102：采用所述对应的方法，在ATCC或者CLS选择配对细胞，一个是肿瘤细胞，一个是对应的正常细胞，作为分析对象；S103：采用WES的方法检测目的细胞系的突变，计算出对应的TMB值，记为X；S104：采用Panel的方法检测目的细胞系的突变，计算出对应的TMB值，记为Y；S105：比较X和Y值，计算相关性R²，确定出TMB分析方法，检测方法的标准；S106：在不同的Panel和分析方法的尝试下，优化出样品的TMB值的标准。

本发明的TMB肿瘤突变符合标准品的制备方法，从临床数据出发，确定TMB的计算和分析方法，符合设计原则；采用ATCC的配对细胞作为标准分析样品，性能稳定，可重复再生；采用WES和Panel的两种分析方法，兼顾完整性、准确性和市场需求；可以分发多个单位试用，兼容不同的检测方法和分析方法，完善对应标准品的性能。可以有效的评估临床检测方法学，指导病人入组和用药，具有很好的商业前景。

另外，本发明上述的TMB肿瘤突变符合标准品的制备方法，还可以具有如下附加的技术特征：

进一步地，在所述步骤S101中，在分析对应的TMB值时，所述方法包括同义突变、非同义突变和Indel。

本发明的另一个目的在于采用上述方法制备的TMB肿瘤突变符合标准品。