[发明专利]一种丹参转录因子SmNAC36基因及其应用在审
| 申请号： | 201910757916.4 | 申请日： | 2019-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN110616224A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 季爱加;陈珍珍;段礼新;刘中秋;李静;吴世丹;陈义都 | 申请（专利权）人： | 广州中医药大学(广州中医药研究院) |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/06;A01H6/00 |
| 代理公司： | 44202 广州三环专利商标代理有限公司 | 代理人： | 颜希文;宋静娜 |
| 地址： | 510000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丹参酮 转录因子 丹参 蛋白 基因工程技术 氨基酸序列 关键酶基因 核苷酸序列 调控机制 分子基础 功能验证 合成途径 生物合成 基因 合成 克隆 应用 | ||
1.一种丹参转录因子SmNAC36基因，其特征在于，所述SmNAC36基因的核苷酸序列如SEQID NO.1所示；或在如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的基础上经替换、缺失或添加一个或多个碱基而得到的具有SmNAC36功能的核苷酸序列。
2.一种丹参转录因子SmNAC36蛋白，其特征在于，所述SmNAC36蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.2所示；或在如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的基础上经替换、缺失或添加一个或多个碱基而得到的具有SmNAC36功能的氨基酸序列。
3.一种提高丹参毛根中丹参酮含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)根据丹参的全基因组序列筛选出SmNAC36转录因子基因，并检测其在丹参的各个组织器官的表达量；所述SmNAC36转录因子基因序列如SEQ ID NO.1所示；
(2)采用基因克隆方法获得丹参SmNAC36转录因子基因，并将其插入植物表达载体获得SmNAC36基因的过表达载体；
(3)构建亚细胞定位载体，瞬时转化拟南芥叶片，分析丹参SmNAC36转录因子在细胞中的定位；
(4)构建真核表达载体转化酵母，检测丹参SmNAC36转录因子与CYPNAC2启动子的结合能力，所述SmNAC36转录因子通过特异性结合到NAC元件上，激活下游目的基因的表达；
(5)将步骤(2)中的植物过表达载体转入农杆菌获得转染重组农杆菌，并瞬时转化浸染丹参外植体，筛选获得具有阳性转化丹参毛状根；
(6)通过检测转化的阳性毛状根中丹参酮的含量，筛选出丹参酮产量提高的株系。
4.如权利要求3所述的提高丹参毛根中丹参酮含量的方法，其特征在于，所述步骤(2)中基因克隆方法采用的引物序列为如SEQ ID NO.3所示和如SEQ ID NO.4所示。
5.如权利要求3所述的提高丹参毛根中丹参酮含量的方法，其特征在于，所述步骤(2)中构建的植物表达载体为pK7WG2D-SmNAC36。
6.如权利要求3所述的提高丹参毛根中丹参酮含量的方法，其特征在于，所述步骤(3)中构建的亚细胞定位载体为35S:PBI221-GFP-SmNAC36。
7.如权利要求3所述的提高丹参毛根中丹参酮含量的方法，其特征在于，所述步骤(4)中构建的真核表达载体为PB42AD-SmNAC36和pLacZ-2u-CYPNAC2。
8.丹参转录因子SmNAC36基因在提高丹参酮含量的方法中的应用。
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