[发明专利]一种检测血液中降钙素原的试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种检测血液中降钙素原的试剂盒，其特征在于，包括包被捕获抗体的固相载体、生物素标记的检测抗体、荧光素标记链霉亲和素、洗涤缓冲液；

所述固相载体为石英针；

所述固相载体上涂覆有多糖复合物，多糖复合物为含质量分数0.5～2.5％壳聚糖、0.1～0.5％甘油，0.5～1.5％聚乙二醇1000的去离子水溶液；

所述洗涤缓冲液为含0.15～0.35M的NaCl、0.05～0.1％vol的曲拉通X-100、3～6g/L的十二烷基肌氨酸钠的PBS缓冲液，所述PBS缓冲液浓度为0.01M，pH为7.4。

2.一种检测血液中降钙素原的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)包被捕获抗体的固相载体：将石英针的下端在多糖复合物中浸泡1-3分钟，4℃冷冻干燥，将降钙素原捕获抗体用0.01M的PBS缓冲液稀释到1mg/mL，将干燥后的石英针下端部放置于降钙素原捕获抗体溶液中，24℃反应2小时进行标记，标记结束后用0.1M的PBS缓冲液洗涤3次，再置于封闭液中封闭8-12h，封闭液为含有1％BSA、0.1％酪蛋白、3％蔗糖的Tris-Hcl缓冲液，制得包被捕获抗体的固相载体；

(2)生物素标记的检测抗体：将降钙素原检测抗体用0.01M的PBS缓冲液稀释到1mg/mL，按质量比抗体：生物素＝1:3-1:8的比例添加生物素，24℃反应8-12小时进行标记，标记结束后用0.1M的PBS缓冲液透析16-24小时，换液3次，制得生物素标记的检测抗体；

(3)洗涤缓冲液：称量3.58g Na₂HPO₄·12H₂O，0.4g KCl，0.54g KH₂PO₄，加800mL双蒸水溶解，调节pH值为7.4，定溶至1000mL，制得PBS缓冲液，根据下述浓度计算并称取配制1L洗涤缓冲液所需各原料的量：0.35M的NaCl、0.1％vol的曲拉通X-100、4g/L的十二烷基肌氨酸钠，称量完毕后置于上述制备的PBS缓冲液中溶解，并混合均匀，即得洗涤缓冲液。