[发明专利]一种烟草质体色素分析方法

说明书

本发明公开了一种烟草质体色素分析方法，称取色素标准品，用适量乙醇溶解于容量瓶中，并用乙醇定容，制得标准溶液母液，取适量各色素母液逐级稀释，配制溶剂标准工作曲线，得到的曲线用于烟草样品的分析定量，标准溶液保存于冰箱；称取烟叶样品置于三角瓶中，加入萃取液丙酮水溶液，超声萃取，取出后静置至室温，取适量萃取液过有机相滤膜，加入乙醇稀释，进行超高效合相色谱分析和标准曲线对比。本发明的有益效果是色素的定量分析时间短，效率高，分离效率高、绿色环保的优势，可大大减少有机溶剂使用量。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种烟草质体色素分析方法。

背景技术

叶绿素和类胡萝卜素是烟草中的主要质体色素种类，烟草色素的准确定量是评价烟草质量的重要手段。目前常用的烟草色素检测方法重复性差、分析时间长或需要消耗大量有机溶剂，因此建立准确性高、省时且环保的分析方法十分必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种烟草质体色素分析方法，本发明的有益效果是同时实现烟草样品中叶绿素a、叶绿素b、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素和叶黄素五种质体色素的定量分析，色素的定量分析时间短，效率高，分离效率高、绿色环保的优势，可大大减少有机溶剂使用量。

本发明所采用的技术方案是按照以下步骤进行：

步骤1：标准曲线配置：

称取色素标准品，用适量乙醇溶解于容量瓶中，并用乙醇定容，制得标准溶液母液，取适量各色素母液逐级稀释，配制溶剂标准工作曲线，得到的曲线用于烟草样品的分析定量，标准溶液保存于冰箱，避光保存，现配现用；

步骤2：样品制备：

称取烟叶样品置于三角瓶中，加入萃取液丙酮水溶液，超声萃取，取出后静置至室温，取适量萃取液过有机相滤膜，加入乙醇稀释，进行超高效合相色谱分析和标准曲线对比。

进一步，步骤1中称取五种色素标准品，用乙醇溶解于100mL容量瓶中，并用乙醇定容，制得浓度为100μg/mL的标准溶液母液，取各色素母液逐级稀释，配制溶剂标准工作曲线，浓度依次为0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0μg/mL，得到的曲线用于烟草样品的分析定量，标准溶液保存于4℃冰箱，避光保存，现配现用。

进一步，步骤2中称取2g烟叶样品，精确至0.1mg，置于50mL三角瓶中，加入25mL萃取溶液，萃取液为体积分数90％的丙酮水溶液，超声萃取20min，取出后静置至室温。取适量萃取液过有机相滤膜，取200μL萃取液，加入800μL乙醇稀释，进行超高效合相色谱分析。

附图说明

图1是五种色素的分子结构；

图2是不同色谱柱对五种色素分离分析的影响；

图3是流速对五种色素分离分析的影响；

图4是改良剂对色素分离分析的影响；

图5是雪茄烟样品(Y-21)中提取质体色素的超高效合相色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

1.实验部分

1.1药品与试剂

本研究中使用的试剂均为色谱纯，其中甲醇、乙醇、丙酮均购于Merck公司(德国)。CO₂为食品级，纯度>99.999％，购于青岛爱若气体化工有限公司(中国)。α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素等均为标准品(纯度>99％)，购于Sigma-Aldrich公司(美国)，结构式如图1所示。

1.2仪器与色谱条件