[发明专利]一种巯基化合物检测试剂及其制备方法和试剂盒

说明书

本发明提供了一种尿液中巯基化合物的检测试剂，该试剂由所制备的磷钨酸试剂，醋酸缓冲液和屏蔽试剂按一定比例混合而成。本发明提供的检测试剂基于原理创新，使用时，直接将检测试剂与待测尿液按照体积比为2:1混合，静置10~15分钟，即可通过肉眼直接判断结果。本发明克服了现有方法中需要对照样辅助判断结果的缺点，且兼具操作简单，安全无毒，检测快速的优点。本发明还提供一种用于尿液中巯基化合物自查的试剂盒。

技术领域

本发明涉及检测试剂领域，具体涉及一种巯基化合物检测试剂及其制备方法和试剂盒。

技术背景

人乳头瘤病毒（HPV）是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。目前已分离出130多种，不同的型别引起不同的临床表现，根据侵犯的组织部位不同可分为:

（1）皮肤低危型：包括HPV1、2、3、4、7、10、12、15等与寻常疣、扁平疣、跖疣等相关；

（2）皮肤高危型：包括HPV5，8，14，17，20，36，38与疣状表皮发育不良有关，其他还与可能HPV感染有关的恶性肿瘤包括：外阴癌、阴茎癌、肛门癌、前列腺癌、膀胱癌；

（3）黏膜低危型如HPV-6，11，13，32，34，40，42，43，44，53，54等与感染生殖器、肛门、口咽部、食道黏膜；

（4）黏膜高危型HPV-16、18、30、31、33、35、39与宫颈癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌等。

前述第（2）和（4）项信息表明，众多恶性肿瘤与HPV 感染有关，因此HPV感染的早期检测至关重要，HPV感染后的一个重要指标就是人体代谢物（如尿液）或分泌物中巯基化合物的含量高于正常人。现有研究表明，HPV感染后引起恶性肿瘤的患者尿液或者分泌物中巯基化合物的含量较正常人明显升高，因此可以通过检测尿液或分泌物中的巯基化合物来进行HPV感染与否的筛查。

现有的巯基化合物检测法均针对巯基化合物还原性来设计，通过氧化巯基化合物使氧化试剂被还原并显色，再通过比色法测定巯基化合物含量，或直接通过观察颜色来判断结果是否为阳性。然而由于尿液或者分泌物中还含有其他还原性物质，目前的检测方法均需加入对照样来判断结果，而一般是通过加入氯化汞使巯基化合物被屏蔽而不与氧化试剂发生反应，从而降低显色程度作为对照。然而氯化汞为剧毒品，会造成操作危险以及环境污染，并且以对照的方式进行检测需要对照样品与被测样品之间有明显的显色差异，否则仅通过肉眼很难判断结果。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的之一在于提供一种巯基化合物检测试剂。

本发明的目的之二在于提供一种巯基化合物检测试剂的加工方法。

本发明的目的之三在于提供一种含有前述巯基化合物检测试剂的试剂盒。

本发明解决其技术问题采用的技术方案如下：

本发明提供的巯基化合物检测试剂是由三部分试剂组分混合配制而成，分别是磷钨酸试剂，醋酸缓冲液和屏蔽试剂，所述屏蔽试剂具有氧化性，呈透明无色，在一定条件下被还原后仍为无色。

本发明的工作原理是：当检测对象为正常人的尿液或者分泌物时，其中也含有还原性物质，如维生素C，普通的磷钨酸试剂与维生素C反应时会快速显色而变蓝，导致假阳性，而加入屏蔽试剂后，维生素C与屏蔽试剂优先反应，则不会再与磷钨酸试剂反应显色，此时显示阴性，为正常。当检测对象为HPV感染患者的时，其中含有大量巯基化合物，含量远高于正常尿液或者分泌物中所含有的还原性物质，此时屏蔽试剂优先与巯基化合物反应，然而不足以将其完全屏蔽，同时正常尿液或者分泌物中高活性的还原物质得到保护，其与磷钨酸试剂反应显色，从而得到阳性结果，为真阳性，即尿液或者分泌物中原有的高活性还原物质充当了巯基化合物的指示反应物。