[发明专利]一种干酪乳杆菌YFI-5及其在抗鲤疱疹病毒II型中的应用

说明书

本发明涉及水产抗病毒微生态制剂技术领域，具体涉及一种干酪乳杆菌YFI‑5及其在抗鲤疱疹病毒2型中的应用。本发明所述干酪乳杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M2019654本发明中的干酪乳杆菌YFI‑5发酵上清液，能在降低鲤疱疹病毒II型（CyHV‑2）对宿主细胞的感染活性，抑制CyHV‑2病毒入侵对细胞的感染。对细胞无毒副作用。饲料添加干酪乳杆菌YFI‑5菌体可有效降低鲫鱼感染CyHV‑2的死亡率，可以用于预防和治疗鲫造血器官坏死症。

技术领域

本发明涉及水产抗病毒微生态制剂技术领域，具体涉及一种干酪乳杆菌YFI-5及其在抗鲤疱疹病毒2型中的应用。

背景技术

鲫是我国淡水养殖鱼类重要品种之一，其年总产量现已超过300万吨，在淡水养殖中占据十分重要的地位。近年来，我国鲫鱼连年发生导致养殖异育银鲫暴发性死亡的出血性疾病，造成重大经济损失。电镜观察患病鲫鱼脾肾组织的超薄切片，发现大量典型疱疹病毒样颗粒，进一步研究确认该病为鲫造血器官坏死症(Crucian Carp HematopoieticNecrosis)，其病原为鲤疱疹病毒II型(Cyprinid herpesvirus2，CyHV-2)。感染CyHV-2的异育银鲫典型临床症状主要表现为食欲减退，离群独游，呼吸频率加快，活力差，沉在水底。患病鱼体表、鳍基和鳃出血，腹部膨胀，眼球突出。鳃丝苍白，肌肉有点状出血，脾和肾发红肿胀，鳔出现点状出血，肝肿大、出血，肠道空。鲫造血器官坏死症是一种高传染性疾病，但其传播范围有限，研究表明，目前该病只对金鱼、鲫鱼及其普通变种有感染性。研究者发现金鱼和鲤鱼的杂交体也是CyHV-2的易感体，且各个规格的鱼体均可感染。

水产养殖过程中如何预防和治疗病害的发生长久以来都是困扰水产养殖业发展的一个重要问题。当前，用于防治水产养殖动物病害的方法主要有药物防治和疫苗免疫两种。然而药物防治引起的副作用、药物残留、耐药性以及水体污染等一系列问题逐渐受到社会各界的普遍重视，除此之外，药物防治针对病毒性疾病的治疗效果不十分明显；受敏感细胞系缺乏、病毒变异、免疫方式不便的影响，渔用疫苗的发展受到影响。因此，需要不断寻求可控制病毒性疾病的有效方法，益生菌因其无毒、无抗药性、无残留、抗菌、抗病毒、促生长、绿色安全的优点受到广泛关注。

近年来，诸多的研究者认为水产养殖过程中乳酸菌在一定程度上有望成为药物的替代品用于各种疾病的预防与治疗，为病害防控方案提供新策略。杨勇等(2006)证明乳酸菌代谢产物对鳗弧菌的生长具有非常显著的抑制作用，抑制效率在90％以上。Gildberg等(1998)用含有大西洋鳕鱼内脏提取出来的乳酸菌的饲料喂鳕鱼苗，3个月后将鱼苗放养在带有强致病弧菌的环境中，能够提高抗病率。已有资料显示乳酸菌不仅有抗菌活性，还具有抗病毒活性。Ang等(2016)发现干酪乳杆菌能够通过抑制柯萨奇病毒的侵染来防治手足口病。目前，乳酸菌在水产养殖过程中被广泛应用，但关于乳酸菌抑制水产病原菌和病毒的研究还较少。

本发明首次筛选出一株干酪乳杆菌可以对鲤疱疹病毒2型具有抑制作用，为该病毒的防治提供了新思路。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种干酪乳杆菌YFI-5，所述的菌株的保藏编号为：CCTCC NO：M2019654。

本发明的另一个目的在于提供了干酪乳杆菌YFI-5的应用。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

本发明的干酪乳杆菌YFI-5自水产养殖区域池塘水样品中分离得到，具体是用生理盐水将养殖池塘水样品稀释后，涂布到BHI固体平板上，最后将平板倒置，于恒温培养箱中30℃培养24h。挑选不同形态的菌落接种于普通肉汤平板上分离纯化，并且对不同的菌进行抗病毒功能的测定，最终获得了一株可抗鲤疱疹病毒II型的菌株，命名为YFI-5，菌株YFI-5经生理生化特征测定和16S rDNA序列同源性分析，鉴定为干酪乳杆菌。