[发明专利]一种从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法

权利要求书

1.一种从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)脱腐处理：取7g酒醅于离心管中，加入3-8mL 0.8-1.2mol/L的CaCl₂溶液和3-8mL 4-6％PVP溶液，涡旋混匀，离心，弃上清；沉淀中加入5-15mL0.04-0.06mol/L的草酸钠溶液，涡旋混匀，离心，弃上清；

(2)PBS处理：步骤(1)处理得到的沉淀中加入10-15mL 0.08-0.12mol/LPBS缓冲液悬浮，加入3-6颗大玻璃珠，涡旋振荡，离心，取上清至新的离心管中，剩余沉淀再洗涤一次，将两次的上清混合，离心，弃去上清，收集细胞沉淀，然后转移至新的离心管中；

(3)提取：步骤(2)处理得到的细胞沉淀中加入0.4-0.6g小玻璃珠，再加入260-330uLSDS提取液，涡旋振荡，然后离心，取上清至新的离心管中；继续在沉淀中加入260-330uLSDS提取液，涡旋振荡，然后离心，取上清和前一步中的上清混合；

(4)去除蛋白质：向步骤(3)得到的上清中加入490-510uL酸性水饱和酚，涡旋混匀，离心，取上清；上清中加入490-510uL氯仿-异戊醇混合液，涡旋混匀，离心，取上清；

(5)沉淀RNA：步骤(4)得到的上清中加入1.8-2.2倍体积的PEG-NaCl混合液，混匀，低温静置1.5-2.5h，离心，弃上清；

(6)清洗RNA：步骤(5)得到的沉淀中加入180-220uL的65-75％乙醇清洗沉淀，离心，弃上清，吹干沉淀；

(7)溶解RNA：在步骤(6)沉淀中加入50uL RNase-free water溶解RNA，低温保存；

步骤(2)所述的大玻璃珠粒径为0.5-0.8cm；

步骤(3)所述的小玻璃珠由粒径0.4-0.6mm的玻璃珠和粒径为0.1-0.2mm的玻璃珠按重量比1.8-2.2：1混合而成；

步骤(3)所述的SDS提取液的配制方法为：0.08-0.12g SDS，480-520uL Tris-HCl、0.8-1.2mL EDTANa₂、90-110uL MgCl₂、590-610uL酸性水饱和酚、8-12uLβ-巯基乙醇与无菌水混匀，定容至10mL。

2.根据权利要求1所述的从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，步骤(2)所述的PBS缓冲液由NaH₂PO₄溶液、Na₂HPO₄溶液和去离子水配制而成。

3.根据权利要求1所述的从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，所述的Tris-HCl浓度为1mol/L，pH为5.0；所述的EDTANa₂浓度为0.1mol/L，pH为8.0；所述的MgCl₂浓度为1mol/L。

4.根据权利要求1所述的从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，所述的酸性水饱和酚pH为4.7-5.5。

5.根据权利要求1所述的从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的氯仿-异戊醇混合液中氯仿与异戊醇的体积比为20-30：1。

6.根据权利要求1所述的从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，步骤(5)所述的PEG-NaCl由NaCl溶液、聚乙二醇和无菌水配制而成。

7.根据权利要求6所述的从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，所述的PEG-NaCl混合液中聚乙二醇的重量含量为25-35％，NaCl的浓度为1.5-1.8mol/L。