[发明专利]一种利用氧化石墨烯提升水生动物疫病检测效率的方法

说明书

本发明公开了一种利用氧化石墨烯提升水生动物疫病检测效率的方法，属于生物技术领域。本发明所提供的方法为将氧化石墨烯加入到水生动物疫病环介导等温扩增反应体系当中进行核酸扩增检测。本方法可有效提高水生动物疫病扩增检测反应的灵敏度，并且，能够抑制假阳性结果的出现、减少非特异性扩增，从而提高检测效率。该方法可以被应用水产养殖和质量检测等领域，具有广泛应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用氧化石墨烯提升水生动物疫病检测效率的方法。

背景技术

我国为水产品产量居世界首位的养殖大国，水产养殖品种繁多，病害发生种类多（如传染性造血器官坏死病、锦鲤疱疹病毒病、白斑综合症、传染性皮下和造血器官坏死病、草鱼出血病等）且综合发病多，发病时间长、流行面积广，病害控制难度大，死亡率高，经济损失大。水生动物疫病具有传染快、爆发性强等特点，因此，水生动物疫病的快速精确检测对于病害预防和防治尤为重要。环介导等温扩增反应作为一种在等温条件下进行的核酸扩增术，可以应用于水生动物疫病的快速检测。由于该技术灵敏度高，很容易产生假阳性结果；同时由于扩增反应过程中涉及到多条引物，引物间很容易发生非特异性结合产生引物二聚体，从而消耗反应体系中的反应底物，降低反应效率和检测灵敏度，同时又容易导致结果假阳性，使得结果误判。因此，如何提升环介导等温扩增检测效率，使得其既有较高检测灵敏度、又抑制非特异性扩增，是水生动物疫病检测领域中急需解决的技术难题。

氧化石墨烯是石墨粉末经化学氧化及剥离后的产物，是单一的原子层，可在横向尺寸上扩展到数十微米，具有聚合物、胶体、薄膜，以及两性分子的特性，在生物技术、生物医学工程、纳米医学、肿瘤治疗、组织工程、药物释放、生物成像和生物分子传感等领域都具有重要潜在应用。尚未见有将氧化石墨烯应用于水生动物疫病检测的报道。

本发明提供了一种利用氧化石墨烯提升水生动物疫病检测效率的方法，能够进一步提高检测的灵敏度、抑制非特异性扩增，可以很好的解决在水生动物疫病检测方面遇到的技术难题。

发明内容

针对现有基于环介导等温扩增技术进行水生动物疫病检测时所遇到的由于灵敏度高、实验环境易被气溶胶污染以及多条引物间发生非特异性结合而容易产生假阳性和灵敏度降低的问题，本发明目的在于：提供一种利用氧化石墨烯提升水生动物疫病检测效率的方法，以提升水生动物疫病检测效率。

本发明目的通过以下方案实现：一种利用氧化石墨烯提升水生动物疫病检测效率的方法，其特征在于，通过向水生动物疫病环介导等温扩增反应体系中添加氧化石墨烯材料来提升检测效率，具体如下：

（1）氧化石墨烯制备：氧化石墨烯试剂利用现有技术制备；

（2）扩增反应体系优化：将氧化石墨烯加入到环介导等温扩增反应体系当中，然后进行核酸扩增；

（3）核酸扩增产物检测：可通过电泳检测、浊度检测或显色检测。

通过向环介导等温扩增反应体系中添加氧化石墨烯材料来提升检测效率，提供了一种的方法。采用本发明的检测方法检测，具有高灵敏度和高特异性的优点。

所述的水生动物疫病环介导等温扩增反应体系优化，其中用量为：在25µL的核酸扩增反应体系中加入氧化石墨烯的终浓度为0.4-10 μg/L。

本发明方法中，水生动物疫病包括但不限于传染性造血器官坏死病、锦鲤疱疹病毒病、白斑综合症、传染性皮下和造血器官坏死病、草鱼出血病等。