[发明专利]一种高产异丁醇的YH-76S菌株及其制备方法在审
| 申请号： | 201910765514.9 | 申请日： | 2019-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN110452847A | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 张沨;王新飞;王兴春 | 申请（专利权）人： | 山东汇冠康博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N13/00;C12N15/01;C12P7/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 11411 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 李威<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 266001山东省青岛*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 异丁醇 高产菌株 培养基 菌株 制备 生物传感器系统 等离子体 大肠杆菌 筛选 常温常压 诱变处理 出发菌 发酵液 活化 诱变 发酵 突变 改造 生产 | ||
1.一种高产异丁醇的YH-76S菌株的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1、出发菌的活化：以实验室保藏的大肠杆菌MG1655作为出发菌，将所述出发菌在固体培养基中划线，并在30℃-37℃的环境下培养出单菌落，将所述单菌落在液体培养基中培养，获得活化的菌体；
步骤2、ARTP诱变处理：将涂布有菌体液的无菌载片置于处理源下进行诱变处理获得突变体单克隆；
步骤3、在培养基中对异丁醇高产菌株筛选：通过BmoR生物传感器系统对步骤2中获得的突变体单克隆进行荧光筛选，筛选经发酵验证荧光强度高于出发菌2倍以上的菌株作为目标菌株；
步骤4、在培养基中对异丁醇高产菌株改造：将转化质粒pYH15，表达丙酮酸到2-酮异戊酸的酶alsS，ilvC和ilvD，构建得到异丁醇高产菌株YH-76S。
2.根据权利要求1所述的大肠杆菌菌株的制备方法，其特征在于：所述培养基包括种子培养基和发酵培养基。
3.根据权利要求2所述的大肠杆菌菌株的制备方法，其特征在于：所述种子培养基和发酵培养基包括：NaH2PO4 1-6g/L，KH2PO4 2-6g/L，NaCl 0.2-2g/L，NH4Cl 0.5-5g/L，MgSO40.5-1mM，CaCl2 0.1-2mM，维生素B1 5-20mg/L和葡萄糖20-60g/L。
4.一种根据权利要求1-3所述的制备方法制备的高产异丁醇的YH-76S菌株，其保藏编号为SYH015。
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