[发明专利]一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法

说明书

本发明公开了一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法，属于生物技术领域。本发明所提供的方法为将碳纳米管加入到环介导等温扩增反应体系当中进行核酸扩增。本方法可有效提高环介导等温扩增反应的灵敏度，并且能够抑制假阳性结果的出现、减少非特异性扩增，从而提高的检测效率。该方法可以被应用食品安全检测等领域，具有广泛应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法。

背景技术

碳纳米管是一种具有特殊结构的一维量子材料，具有许多特殊的力学、电学和化学性能，近些年随着碳纳米管研究的深入，其广阔的应用前景也不断地展现出来。阎锡蕴等（CN200410102574.6）、张治洲和汪名春（CN200610015471.5）分别公开了利用纳米管在优化PCR扩增中的应用。作为与聚合酶链式反应作用原理不同的另一种核酸扩增技术——环介导等温扩增反应的优化方面，尚未见有碳纳米管应用的报道。

环介导等温扩增反应（Loop-mediated isothermal amplification，缩写为LAMP）是一种在等温条件下进行核酸扩增的技术，可以广泛应用于食品安全检测等领域。该技术灵敏度高，在等温条件下扩增15min-1h即可产生10⁹～10¹⁰倍的扩增子，若实验环境被气溶胶污染，则很容易产生假阳性结果。另外，由于扩增反应过程中涉及到多条引物，引物间很容易发生非特异性结合产生引物二聚体，从而消耗反应体系中的反应底物，降低反应效率和检测灵敏度，同时又容易导致结果假阳性，使得结果误判。因此，如何优化环介导等温扩增反应，使得其既有较高检测灵敏度、又抑制非特异性扩增，一直是该技术领域急需解决的技术难题。

本发明提供了一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法，能够进一步提高检测的灵敏度、抑制非特异性扩增，可以很好的解决在环介导等温扩增检测方面遇到的技术难题。

发明内容

针对现有环介导等温扩增检测技术中所遇到的由于灵敏度高、实验环境易被气溶胶污染以及多条引物间发生非特异性结合而容易产生假阳性和灵敏度降低的问题，本发明目的在与提供一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法。本发明通过向环介导等温扩增反应体系中添加碳纳米管材料来实现优化效果，提供了一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法。采用本发明的检测方法检测，具有高灵敏度和高特异性的优点。

本发明目的通过以下方案实现：一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法，通过向环介导等温扩增反应体系中添加碳纳米管材料来实现对环介导等温扩增的优化，包括如下步骤：

（1）扩增反应体系优化：将碳纳米管加入到环介导等温扩增反应体系当中，然后进行核酸扩增；

（2）核酸扩增产物检测：可通过电泳检测、浊度检测或显色检测。

本发明中，碳纳米管制备：碳纳米管试剂可利用现有技术制备。

所述的环介导等温扩增反应体系优化，其中用量为：在25µL的核酸扩增反应体系中加入碳纳米管的终浓度为0.2- 8.0 μg/L。