[发明专利]一株驴源沙门氏菌AD19株及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种驴源沙门氏菌AD19株及其应用,微生物保藏号为CGMCC N0.18046，保藏日期：2019年6月27日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明从山东某驴场采集流产死驹病料中分离筛选出1株革兰阴性杆菌，将分离菌株纯化培养后，经形态学鉴定、生化鉴定、16Sr DNA的克隆和序列分析，判定该株分离菌为沙门氏菌；致病性试验结果表明，该株沙门氏菌的对小鼠有一定致死率，其中最主要是可以造成孕小鼠的流产。该菌株可用于制备导致驴流产的沙门氏菌的灭活疫苗。由该菌株制备的灭活菌苗有良好的免疫原性，其安全性高，保护效果好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种驴沙门氏菌AD19株及其应用。

背景技术

沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌属肠道细菌科，包括那些引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外，还可感染很多动物包括哺乳类、鸟等。沙门氏菌病是由沙门氏菌属的细菌引起的畜禽组传染病的总称，本病常发生于猪、鸡、牛等动物，其中导致流产沙门菌是引起马副伤寒的病原体，与流产、新生儿败血症和多发性关节炎有关。该病极易感染初产母畜和幼驹，多数在流产发生前，一般无明显的临床症状，流产发生比较突然，而关于马属动物特别是驴的沙门氏菌病国内报道很少。

驴是孕期比较长的哺乳动物（360天左右）且多为单胎，为满足规模化养殖快速增加存栏量的需要，促进养驴业的快速发展，尽快净化本病和控制该菌的发生和流行，预防阻断驴沙门氏菌病的病原，必须分离当地的驴沙门氏菌流行株，加强病原生化和分子鉴定等研究和可能应用，实现对当地导致驴流产沙门氏菌病的有效防治。

发明内容

一株驴源沙门氏菌株AD19，微生物保藏号为CGMCC N0.18046，保藏日期：2019年6月27日 ，分类命名:沙门氏菌 Salmonella SP.，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌在沙门氏菌显色培养基中培养菌落呈紫色、中等大小、边缘整齐、光滑湿润、圆形凸起。接种至营养肉汤的菌液37℃培养24h后，利用革兰氏染色观察，该菌获得纯化，为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌。

上述驴沙门氏菌株AD19，其16S rDNA是序列表1所示的核苷酸序列。

16S rDNA的PCR扩增细菌16S rDNA的通用引物为：

F27：５′－agagttgatcctggctcag－３′（SEQID No.2），

R1492：５′－aaggaggtgatccaaccgca－３′（SEQID No.3）。

上述的驴沙门氏菌株AD19在制备灭活菌苗中的应用。包括将上述的驴沙门氏菌株AD19经蛋白胨和牛肉膏粉为组份配方的营养肉汤扩菌，甲醛灭活，无菌检验，安全检验合格后与等量的佐剂乳化制备沙门氏菌灭活疫苗。

有益效果

本发明提供了一株分离自山东地区导致流产的驴源沙门氏菌优势流行株。从驴流产的病料中仅分离出沙门氏菌致病菌，为导致驴流产的致病源提供准确的依据。在小鼠侵染实验中，表明该株细菌对小鼠的致病能力一般，但对于怀孕小鼠的致流产能力十分强，这与该株沙门氏菌对驴造成的孕期流产一致。本发明用其制备该菌的灭活菌苗免疫性好，对于有效预防当地流行菌株引起的驴流产有重要价值。

附图说明

图1为驴沙门氏菌株AD19的革兰氏染色形态；

图2为PCR扩增产物 M：Marker；１：分离菌株AD19。

具体实施方式