[发明专利]基于酶切PCR的特定基因片段富集检测试剂盒和方法在审
| 申请号： | 201910770408.X | 申请日： | 2019-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN110438211A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 黄种山;其他发明人请求不公开姓名 | 申请（专利权）人： | 福建晨欣科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12N9/22;C12N15/55 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 350005 福建省福州市晋安*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酶切 富集检测 突变基因 常规PCR 缓冲液 构建 氨基酸序列 特异性扩增 野生型基因 堆肥 基因片段 扩增体系 低丰度 耐高温 试剂盒 限制酶 富集 扩增 样本 引入 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于特定基因片段富集检测的酶切PCR试剂盒，其特征在于所述酶切PCR试剂盒主要组份包括（1）耐高温Ⅱ型限制性内切酶DFh2及其缓冲液，其中酶DFh2的氨基酸序列如SEQ NO：2所示，缓冲液选用美国NEB公司的CutSmart Buffer；（2）常规PCR通用组份，主要包括配套的耐热DNA聚合酶、PCR缓冲液和底物dNTPs；（3）设计用于特异性扩增目标基因片段的常规PCR引物。
2.如权利要求1中所述的一种用于特定基因片段富集检测的酶切PCR试剂盒的使用方法，其特征在于酶切PCR富集检测方法主要包括如下步骤：（1）准备好酶切PCR检测试剂盒；（2）配制酶切PCR扩增体系，具体做法是在常规PCR体系的基础上再按每25μl扩增体系中加入1.5μg的酶DFh2和0.25μl的10×CutSmart Buffer获得；（3）在目标基因片段常规PCR扩增条件的基础上延伸时间增加15s以上以及循环数增加5次以上，按照该条件进行酶切PCR；（4）酶切PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，有特异性目标基因片段条带产生则表明样本中含有目标突变基因片段，没有特异性目标基因片段条带产生则表明样本中不含目标突变基因片段，酶切PCR可以富集检测含量低至1%的目标突变基因片段。
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