[发明专利]一种快速筛查荷斯坦牛HH5遗传缺陷基因携带者的方法

权利要求书

1.与荷斯坦牛HH5遗传缺陷相关的分子标记，其特征在于，其为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的分子标记，其特征在于，该分子标记可用特异性引物组合通过PCR检测得到，所述特异性引物组合为以下任一：

（1）由核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的特异性引物组成的组合；或

（2）由核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2-3和SEQ ID NO.4-5所示的特异性引物组成的组合。

3.一种用于检测权利要求1或2所述分子标记的特异性引物组合，其特征在于，其为以下任一：

（1）由核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示引物组成的组合；或

（2）由2对特异性引物对组成的引物组合，所述2对特异性引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2-3和SEQ ID NO.4-5所示。

4.一种用于筛查荷斯坦牛HH5遗传缺陷基因携带者的试剂盒，其特征在于，含有2对特异性引物对，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2-3和SEQ ID NO.4-5所示。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，其工作步骤如下：

（1）提取待测牛样品的基因组DNA，以其为模板，以SEQ ID NO.2-3和SEQ ID NO.4-5所示的引物为扩增引物，进行双重PCR反应；

（2）对PCR产物进行凝胶电泳检测，根据电泳结果进行基因型判定：若仅扩增出一条209bp的条带，则待测样品来自荷斯坦牛HH5遗传缺陷基因野生型纯合子；若扩增出两个条带，分别为209bp和349bp，则待测样品来自荷斯坦牛HH5遗传缺陷基因携带者。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤（1）中PCR反应条件：94℃预变性5min；然后35个循环，94℃变性30 sec，56℃复性30 sec，72℃延伸30 sec；最后72℃延伸7min。