[发明专利]非洲猪瘟病毒四基因缺失弱毒株及其应用

说明书

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒四基因缺失弱毒株，该弱毒株是非洲猪瘟病毒SY18分离株的四基因缺失弱毒株，其缺失以下基因的功能蛋白：CD2v基因编码产物和三个多基因家族基因(MGF360‑12L、MGF360‑13L、MGF360‑14L)编码产物。本发明还公开了上述非洲猪瘟病毒弱毒株在制备预防或治疗非洲猪瘟的疫苗中的应用。本发明的非洲猪瘟病毒弱毒株，能对ASFV亲本毒株的攻击提供完全的免疫保护作用，且安全性高，适于作为预防非洲猪瘟的疫苗候选株。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种非洲猪瘟病毒四基因缺失弱毒株及其应用。

背景技术

非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的猪的一种以发热和全身脏器出血为特征的急性烈性传染病，家猪病死率可高达100％。该病于1921年首先在肯尼亚爆发，随后在整个非洲的家猪和野猪中广泛流行，逐渐演变成24个基因型。20世纪50年代传入欧洲，整个欧洲用了40年消除该病。然而，该病自2007年再次从东非传入格鲁吉亚，随后便广泛在东欧散播，并于2017年传入俄罗斯远东地区伊尔库斯克。2018年8月初，扈荣良研究员率先报道我国第一例非洲猪瘟疫情，短短一年之内，该病蔓延至全国30个省市自治区，已造成全国20％以上减产率，损失超过百亿元，目前该病防控形势异常严峻复杂。

ASFV是一种大型的胞质内复制的病毒，病毒粒子二十面体对称，直径200nm，呈同心圆状结构。非洲猪瘟病毒基因组为末端共价闭合的单分子线性双链DNA，基因组全长为170～190kb，不同毒株的基因组长度不一致。ASFV整个基因组含有超过160个开放阅读框，可以编码150～200种蛋白质。基因组中部为中央保守区(C区)，长度约125kb，C区两侧各有一个可变区，右侧可变区(VR)长度13-22kb，含有5个多基因家族(MGF)。该区域与病毒抗原变异、逃避宿主防御系统等机制有关。

疫苗是预防和控制传染病最有效、最经济的手段，自ASF传入欧洲后，ASF有效疫苗的研发受到了多个国家尤其是欧洲研究机构的高度重视，取得了重要进展，如发现ASFV灭活疫苗不能诱导有效中和抗体，必需同时考虑体液免疫和细胞免疫作用；亚单位疫苗较减毒活疫苗更加安全，从现阶段进展来看，通过病毒载体联合表达不同的抗原组合提高ASFV基因工程亚单位疫苗免疫效力是可行思路；通过敲除毒力基因的减毒活疫苗的保护效果最好，最具开发前景，但是存在不同毒株缺失同一基因产生的效果不同，缺失不充分引起的免疫副反应及田间散毒，以及多基因缺失造成的过度致弱会使致弱毒株失去保护作用等问题，需要在研究中兼顾安全性(副作用、持续感染、田间散毒等生物安全风险)和保护性的平衡。

由于ASFV致病机制复杂，病毒感染和免疫机理不清，迄今为止，仍无有效疫苗防控该病。尽管针对ASF疫苗的研究起始于20世纪60年代末，近年来报道也很多，但尚未成功应用于实际。迄今，国际上采用基因工程手段获得了多个ASFV基因缺失疫苗候选株，以及通过细胞传代致弱和从自然界分离弱毒株的方法获得了弱毒疫苗候选株，其中一些疫苗候选株在研究报道中针对同源病毒株攻击有50％～100％保护率，但对异源病毒的攻击保护效果不甚理想。此外，无论是人工基因缺失弱毒株还是自然缺失弱毒株，猪免疫后出现剂量依赖性副反应，免疫猪出现精神沉郁，食欲降低，发热、病毒血症、高丙球蛋白血症、肺炎、关节肿胀、跛行、慢性病变和僵猪等，降低了疫苗的实际使用价值。目前人们普遍关心的是非洲猪瘟基因缺失株和自然弱毒株作为疫苗的安全性问题。我国由于种种原因针对非洲猪瘟疫苗研究和储备严重滞后，非洲猪瘟疫情发生后，非洲猪瘟疫苗的研究再次提上日程。

目前我国对非洲猪瘟(ASF)的防控形势异常严峻，急需开发安全高效的ASF疫苗。

发明内容

本发明要解决目前国内缺乏安全有效的非洲猪瘟疫苗的技术问题，提供一种非洲猪瘟病毒基因缺失弱毒株，该基因缺失弱毒株能对ASFV亲本毒株的攻击提供完全的免疫保护作用，且安全性高，适于作为预防非洲猪瘟的疫苗候选株。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现: