[发明专利]一种促进枫香属植物体胚成熟的液体悬浮培养方法

权利要求书

1.一种促进枫香属植物体胚成熟的液体悬浮培养方法，其特征是，包括如下步骤：

1）将枫香属植物外植体接种到诱导培养基上，进行胚性组织诱导培养，获得胚性愈伤组织；

2）将胚性愈伤组织接种到体胚发生培养基上，进行体胚发生培养，获得未成熟体胚，其中所述未成熟体胚包括从球形胚到未成熟子叶胚中任何发育阶段的体胚，其中所述体胚发生培养基为改良Blaydes基本培养基 +蔗糖 40 g/L+ 植物凝胶 3-6 g/L；

所述改良Blaydes基本培养基为：

KNO₃ 1000 mg/L KI 0.6 mg/L

MgSO₄.7H₂O 71.5 mg/L Na₂MoO₄·2H₂O 0.0025 mg/L

KH₂PO₄ 300 mg/L CuSO₄·5H₂O 0.025 mg/L

CaCl₂.2H₂O 210 mg/L CoCl₂·6H₂O 0.025 mg/L

KCl 71.5 mg/L Na₂EDTA·2H₂O 37.2 mg/L

NH₄NO₃ 1000 mg/L FeSO₄·7H₂O 27.8 mg/L

Ca(NO₃)₂·4H₂O 500 mg/L 肌醇 2 mg/L

MnSO₄·4H₂O 6.06 mg/L 烟酸 0.1 mg/L

ZnSO₄·7H₂O 4 mg/L 维生素B6 0.1 mg/L

H₃BO₃ 2 mg/L 维生素B1 1 mg/L；

3）将具有未成熟体胚的愈伤组织接种到体胚液体成熟培养基中，进行体胚液体成熟培养，将经过体胚液体成熟培养的混合物通过孔径大于1mm的筛子，未通过筛孔的体胚，即为成熟体胚，其中所述体胚液体成熟培养基是改良的 Blaydes 培养基+蔗糖40g/L。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是，还包括步骤1A），将步骤1）培养获得的胚性愈伤组织接种到增殖培养基上，进行胚性愈伤组织增殖培养，获得增殖胚性愈伤组织后再接种到体胚发生培养基上，进行所述的体胚发生培养。

3.如权利要求2所述的方法，其特征是，步骤1A）中所述胚性愈伤组织增殖培养为将胚性愈伤组织接种到胚性愈伤组织固体增殖培养基上，进行胚性愈伤组织固体增殖培养；或将胚性愈伤组织接种到胚性愈伤组织液体增殖培养基中，进行胚性愈伤组织液体增殖培养。

4.一种杂交枫香的繁殖方法，其特征是，包括如下步骤：

A）将灭菌的杂交枫香的外植体接种到诱导培养基上，进行胚性组织诱导培养；

B）将诱导培养获得的胚性愈伤组织接种到增殖培养基上，进行胚性愈伤组织增殖培养；

C）将增殖培养后的胚性愈伤组织接种到体胚发生培养基上，进行体胚发生培养，获得未成熟体胚，其中所述未成熟体胚包括从球形胚到未成熟子叶胚中任何发育阶段的体胚；所述体胚发生培养基为改良Blaydes基本培养基 +蔗糖 40 g/L+ 植物凝胶 3-6 g/L；

所述改良Blaydes基本培养基为：

KNO₃ 1000 mg/L KI 0.6 mg/L

MgSO₄.7H₂O 71.5 mg/L Na₂MoO₄·2H₂O 0.0025 mg/L

KH₂PO₄ 300 mg/L CuSO₄·5H₂O 0.025 mg/L

CaCl₂.2H₂O 210 mg/L CoCl₂·6H₂O 0.025 mg/L

KCl 71.5 mg/L Na₂EDTA·2H₂O 37.2 mg/L

NH₄NO₃ 1000 mg/L FeSO₄·7H₂O 27.8 mg/L

Ca(NO₃)₂·4H₂O 500 mg/L 肌醇 2 mg/L

MnSO₄·4H₂O 6.06 mg/L 烟酸 0.1 mg/L

ZnSO₄·7H₂O 4 mg/L 维生素B6 0.1 mg/L

H₃BO₃ 2 mg/L 维生素B1 1 mg/L；

D）将具有未成熟体胚的愈伤组织接种到体胚液体成熟培养基中，进行体胚液体成熟培养，将经过体胚液体成熟培养的混合物通过孔径大于1mm的筛子，未通过筛孔的体胚，为成熟体胚，其中所述体胚液体成熟培养基是改良的 Blaydes 培养基+蔗糖40g/L；

E）将成熟体胚接种到萌发培养基上，进行体胚萌发培养，获得体胚苗；

F）对体胚苗进行炼苗，温室培养，移栽。