[发明专利]生产O-琥珀酰高丝氨酸的微生物和使用其生产O-琥珀酰高丝氨酸的方法

说明书

本发明的名称是生产O‑琥珀酰高丝氨酸的微生物和使用其生产O‑琥珀酰高丝氨酸的方法。本发明涉及多肽，表达多肽的产O‑琥珀酰高丝氨酸的微生物，和使用其生产O‑琥珀酰高丝氨酸的方法，所述多肽对甲硫氨酸的反馈抑制具有抗性并且具有高丝氨酸O‑琥珀酰转移酶活性。

本申请为分案申请，原申请的申请日是2014年10月22日、申请号是201480058107.X、发明名称为“生产O-琥珀酰高丝氨酸的微生物和使用其生 产O-琥珀酰高丝氨酸的方法”。

技术领域

本发明涉及分离的多肽、表达该多肽的微生物和使用其生产O-琥珀酰高 丝氨酸的方法，所述分离的多肽对甲硫氨酸的反馈抑制具有抗性并且具有高 丝氨酸O-琥珀酰转移酶活性。

背景技术

已知自然界中存在的大多数微生物利用O-琥珀酰高丝氨酸或O-乙酰高丝 氨酸作为中间体用于生物合成甲硫氨酸。一般而言，由将琥珀酰辅酶A的琥 珀酰基缀合至高丝氨酸的高丝氨酸O-琥珀酰转移酶(MetA)生产O-琥珀酰高丝 氨酸，并且由将乙酰辅酶A的乙酰基缀合至高丝氨酸的高丝氨酸O-乙酰转移 酶(MetX)生产O-乙酰高丝氨酸。即，在中间体间生产O-琥珀酰高丝氨酸中， metA在生产其的微生物的发育中是最重要的基因之一。同时，与MetA不同， MetX已知为没有被反馈抑制并且具有高的酶稳定性。

当甲硫氨酸生物合成途径中的胱硫醚γ合成酶被阻断时，O-琥珀酰高丝 氨酸被集聚，并且因此产O-琥珀酰高丝氨酸的菌株需要L-甲硫氨酸。因此， 将甲硫氨酸加入到培养基中，并且高丝氨酸O-琥珀酰转移酶的活性被加入到 培养基中的甲硫氨酸抑制，并且最终，不能获得高浓度的O-琥珀酰高丝氨酸。

因此，许多在先专利已经将它们的研究集中于从反馈控制系统解除 (release)metA的反馈抑制。然而，由metA编码的高丝氨酸O-琥珀酰转移酶具 有以下问题：其野生型蛋白本身具有低的稳定性并且为了解除反馈抑制引入 突变加剧不稳定性。因此，对于具有高生产力的产O-琥珀酰高丝氨酸的菌株 的开发而言，去除metA基因的反馈抑制和稳固酶稳定性是必需的。

发明内容

[技术问题]

为了解决上面描述的metA的反馈抑制的现象和酶不稳定性问题，本发明 人已经努力开发了具有稳固的酶稳定性同时不受甲硫氨酸反馈抑制的高丝氨 酸O-琥珀酰转移酶，并且就这一点而言，已经筛选了具有活性的新型的酶。 作为选择如此筛选的候选基因并在将它们引入埃希氏杆菌属(Escherichia)某 种之后在烧瓶中培养的结果，本发明人已经发现了O-琥珀酰高丝氨酸的生产， 并且发现了如此选择的基因具有高丝氨酸O-琥珀酰转移酶活性和对甲硫氨酸 的反馈抑制的抗性，因此完成本发明。

[技术方案]

本发明的目标是提供新型的分离的多肽，其对甲硫氨酸的反馈抑制具有 抗性并且具有高丝氨酸O-琥珀酰转移酶活性。

本发明的另一目标是提供编码该新型的分离的多肽的多核苷酸。

本发明的进一步的目标是提供生产O-琥珀酰高丝氨酸的微生物，其表达 该新型的分离的多肽。

本发明的进一步的目标是提供使用上面的微生物生产O-琥珀酰高丝氨酸 的方法。

[发明的有益效果]

生产O-琥珀酰高丝氨酸的微生物——其包括新型的分离的多肽，该多肽 对甲硫氨酸的反馈抑制具有抗性并且具有高丝氨酸O-琥珀酰转移酶活性—— 可以对甲硫氨酸的反馈抑制具有抗性并且以高产量生产O-琥珀酰高丝氨酸， 并且因此可以有效地用于以高产量生产L-甲硫氨酸，其使用O-琥珀酰高丝氨 酸作为前体。

[实施本发明的最佳模式]

为了实现上面的目标，在一方面，本发明提供了对甲硫氨酸的反馈抑制 具有抗性并且具有高丝氨酸O-琥珀酰转移酶活性的新型的分离的多肽。