[发明专利]一种柱花草不育基因的标记引物对及其应用

说明书

本发明公开了一种柱花草不育基因的标记引物对及其应用，本发明提供了一段442bp能够在不育柱花草中扩增得到的特异性DNA片段和该序列的一对引物，可用于鉴别不育柱花草，本发明提供的鉴定不育柱花草的方法具有耗时短，操作简便，特异性强，鉴定准确且省时省力。为建立柱花草稳定的雄性不育系提供新的理论基础，为柱花草杂交育种奠定基础，具有很大的科学价值和应用价值。

技术领域

本发明属于分子标记鉴定领域，具体涉及一种柱花草不育基因的标记引物对及其应用。

背景技术

序列特异性扩增区域(Sequence characterized amplified regions，SCARs)标记通常是由RAPD、SRAP、ISSR标记转化而来，是将上述分子标记筛选出的特异标记片段进行克隆和测序，根据其碱基序列设计一对特异引物，用于对特征扩增区域的特异性扩增。SCAR标记一般表现为扩增片段的有无，是一种显性标记，具有稳定性好、可重复性强等优点，已成为育种实践中能直接应用的首选标记。柱花草(Stylosanthes)，巴西苜蓿，热带苜蓿等。描述夏季生长最旺的多年生直立的草本植物。高达1米。茎上多毛，叶羽状三出。穗状花序聚集成顶生头状花序，花黄色，荚果具一个结实的节和很小的喙，种子黄棕色。柱花草属植物原产南美洲、中美洲及加勒比海地区。1962年华南热带作物研究院从中美洲引入海南试种，主要作为橡胶园覆盖作物。1980年后，广东、广西、海南等地先后从澳大利亚、国际热带农业中心引种，并应用于生产。中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所从20世纪60年代起从哥伦比亚、澳大利亚等地引进柱花草种植，先后培养了热研2号(Stylosanthesguianenisis cv.Reyan No.2)、热研5号(Stylosanthes guianenisis cv.Reyan No.5)、西卡(Stylosanthes scabra Vog.cv.Seca)、热研7号(Stylosanthes guianenisis cv.ReyanNo.7)、热研10号(Stylosanthes guianenisis cv.Reyan No.10)、热研13号(Stylosanthesguianenisis cv.Reyan No.13)、热引18号(Stylosanthes guianenisis cv.ReyinNo.18)、热研20号(Stylosanthes guianenisis cv.Reyan No.20)及热研21号(Stylosanthes guianenisis cv.Reyan No.21)等9个优良柱花草品种。目前，热研2号、热研5号等优良柱花草品种已在广东、广西、福建、海南、云南、贵州、四川等地区广泛种植。这些品种均是通过常规选育或辐射育成的品种，还没有杂交品种，因此，开展柱花草杂交育种显得尤为重要。柱花草属于十字授粉植物，因其花小、去雄困难，阻碍了开展杂交育种的进程，因此获得稳定的雄性不育系是开展杂交育种的前提。因此，开发鉴别柱花草不育基因的SCAR分子标记，利用该分子标记鉴别不育柱花草花粉可以筛选出稳定的柱花草雄性不育系尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种柱花草不育基因的标记引物对及其应用。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种柱花草不育基因的标记引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，SEQ ID NO：1为：5’-ACCCCTCTCTCAATTCTTCCC-3’；SEQ ID NO：2为：5’-AGCACAATCTCTACAGCGCA-3’。

上述的引物对在柱花草花粉不育基因鉴定方面的应用。

一种柱花草花粉不育基因的DNA分子鉴定方法，它包括以下步骤：

S1.扩增：利用序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的SCAR引物对，对柱花草DNA样品进行PCR扩增；

S2.鉴定：通过电泳对PCR产物进行鉴定；电泳结果中出现一条442bp条带的样品为不育柱花草。