[发明专利]一种硝化细菌的PCR鉴定方法

权利要求书

1.一种硝化细菌的PCR鉴定方法，其特征在于：具体步骤如下：

⑴引物的设计与合成：以硝化细菌的专属特征性基因-亚硝酸还原酶基因为模板，设计并合成一对特异性引物，引物具体序列如下：

上游引物(F)：5'-GGTGAATTCATGGACATCCGAGCTCAAGTT-3'，其核苷酸序列如Seq ID No:1所示；

下游引物(R)：5'-GCAAAGCTTTTACTAGAAGCCTATGGTCCTCT-3'，其核苷酸序列如Seq IDNo:2示；

⑵菌种基因组DNA的提取：采用天根细菌基因组DNA提取试剂盒提取待测菌种的基因组DNA；

⑶PCR扩增体系：分别以步骤(1)中合成的特异引物为PCR扩增引物，以步骤(2)中提取的基因组DNA为PCR扩增模板，进行PCR扩增，25ul PCR扩增体系如下：

试剂名称	加样量ul
10×PCR buffer	2.5
2]]>	2.0
上游引物(F)	0.5-1.0
下游引物(R)	0.5-1.0
基因组DNA	0.2-1.0
dNTPs	2.0
Taq聚合酶	0.2
2O]]>	补足25ul

⑷PCR扩增反应条件：PCR扩增体系准备好后，以引物的退火温度为58-63℃设定PCR扩增的反应条件，具体反应条件如下：

⑸琼脂糖水平电泳：观察是否含有大小为1542bp目标条带，其核苷酸序列如Seq IDNo:3所示；若有则判定为试样中含有硝化细菌。

2.根据权利要求1所述的硝化细菌的PCR鉴定方法，其特征在于：步骤⑵中所述的基因组DNA提取方法为试剂盒法，保证所得DNA的纯度OD₂₆₀/OD₂₈₀在1.8-2.0之间。

3.根据权利要求1所述的硝化细菌的PCR鉴定方法，其特征在于：步骤⑸中所述的凝胶浓度w/v为0.8-1.5％，电泳条件是120V、40min。