[发明专利]一种辣木提取物指纹图谱的建立方法及其指纹图谱

权利要求书

1.一种辣木提取物指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.供试品溶液的制备：以辣木提取物样品制成供试品溶液，备用；所述辣木提取物的制备方法，至少包括以下步骤：

（1）原材前处理：取辣木药材，使用粉碎机粉碎后过网筛，所述网筛的孔径为0.8-1.2mm，得辣木粉；

（2）提取:采用高效高压差低温连续式提取设备，按照药材料液质量比为1：15-50的比例加入水进行提取，提取的温度为≤30℃、提取压力≥20Mpa，得辣木提取液；

（3）离心：将辣木提取液采用离心机离心，离心机转速为3500-15000r/min，得到辣木离心液；

（4）过滤：辣木离心液用孔径≤500nm的陶瓷膜进行微滤，得到辣木微滤清液；

（5）浓缩：辣木微滤清液经过反渗透膜进行膜进行浓缩，得到辣木膜浓缩液；

（6）灭菌、干燥：辣木膜浓缩液进入10万级以上洁净区，添加辅料、灭菌、进行干燥，得到辣木叶干燥粉；

（7）制粒：辣木叶干燥粉添加粘合剂进行制粒，制粒工序为湿法制粒/干法制粒；

取8-16批次的辣木提取物0.85-1.15g，加入10ml容量瓶中，用纯化水定容，摇匀后用水系微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；

b.对照品溶液的制备：分别取没食子酸对照品和异槲皮苷对照品，分别制成没食子酸对照品溶液和异槲皮苷对照品溶液，备用；

c.高效液相色谱测定：采用高效液相色谱仪，以甲醇和无机酸的水溶液作为流动相分别将供试品溶液、没食子酸对照品溶液和异槲皮苷对照品溶液进行检测，用Diamonsi C₁₈色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱具体如下：t=0~20min：5%~10% 甲醇、95%~90% 无机酸水溶液；t=20~40min：10%~28% 甲醇、90%~72% 无机酸水溶液；t=40~65min：28%~50% 甲醇、72%~50% 无机酸水溶液；t=65~75min：50%~98% 甲醇、50%~2% 无机酸水溶液；检测波长：230nm；将得到高效液相色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，得到辣木提取物的指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的一种辣木提取物指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤b中对照品溶液的制备方法具体为：精密称取没食子酸5-20mg、异槲皮苷5-15mg于100mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得没食子酸对照品溶液、异槲皮苷对照品溶液。

3.根据权利要求1所述的一种辣木提取物指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤c中高效液相色谱的检测条件为：流动相A为甲醇；流动相B为无机酸的水溶液；柱温：30-35℃；流速：0.8-1.5mL·min^－1；进样量5-20μL，洗脱程序为梯度洗脱。

4.根据权利要求1所述的一种辣木提取物指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述无机酸的水溶液选自体积百分比浓度为0.02~0.1%的磷酸水溶液。

5.根据权利要求1所述的一种辣木提取物指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述指纹图谱中共有峰为20个，其中7号峰为没食子酸，18 号峰为异槲皮苷。

6.根据权利要求1所述的一种辣木提取物指纹图谱的建立方法，其特征在于，以7号峰作为参照峰，计算各共有峰与参照峰的相对保留时间和相对标准偏差，峰1-20的相对保留时间分别如下：1号峰平均相对保留时间为0.28±0.007；2号峰平均相对保留时间为0.31±0.004；3号峰平均相对保留时间为0.38±0.003；4号峰平均相对保留时间为0.46±0.009；5号峰平均相对保留时间为0.54±0.01；6号峰平均相对保留时间为0.6±0.008；7号峰平均相对保留时间为1.00±0.00；8号峰平均相对保留时间为1.06±0.002；9号峰平均相对保留时间为2.07±0.011；10号峰平均相对保留时间为2.73±0.024；11号峰平均相对保留时间为2.92±0.032；12号峰平均相对保留时间为3.13±0.049；13号峰平均相对保留时间为3.7±0.025；14号峰平均相对保留时间为3.81±0.036；15号峰平均相对保留时间为4.35±0.041；16号峰平均相对保留时间为5.24±0.061；17号峰平均相对保留时间为6.16±0.064；18号峰平均相对保留时间为6.48±0.076；19号峰平均相对保留时间为6.67±0.086；20号峰平均相对保留时间为7.35±0.202。