[发明专利]一种大黄鱼卵分离蛋白-EGCG结合物的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种大黄鱼卵分离蛋白‑EGCG结合物的制备方法，包括步骤：溶解大黄鱼卵分离蛋白、自由基诱导分离蛋白、加入表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、透析及干燥。本发明采用自由基诱导的方法将大黄鱼卵分离蛋白与EGCG结合，并通过透析的方法除去未结合的EGCG，以此来提高大黄鱼卵分离蛋白的抗氧化能力。结合物中EGCG含量高达13.48mg/g大黄鱼卵分离蛋白且结合物具有良好的抗氧化活性，可以作为一种新型的抗氧化剂应用于食品工业当中。

技术领域

本发明涉及水产加工技术领域，涉及一种新型抗氧化剂的制备方法，更具体地说，涉及一种大黄鱼卵分离蛋白-EGCG结合物的制备方法及其应用。

背景技术

大黄鱼卵是大黄鱼加工过程中的主要副产物，约占鱼体总质量的15％～25％其蛋白质含量高达59.03±0.08％左右(以干重计)，目前，我国很多的大黄鱼卵除了被制成饲料外，其余的均被丢弃，这造成了极大的资源浪费及环境污染。前期研究表明大黄鱼卵分离蛋白具有优质的氨基酸组成及功能特性，但是其抗氧化活性较弱。

茶多酚是茶叶中的主要活性物质，具有抗氧化、抗衰老、杀菌、预防心脑血管疾病等诸多保健功效，现已成为医药、食品等方面开发的热点，茶多酚的主要化学成分为儿茶素类化合物。儿茶素类化合物主要包括表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)4种物质，其中EGCG的含量最多，抗氧化活性最好。因此，如果可以将大黄鱼卵分离蛋白与EGCG有效的结合在一起，可以有效的提高大黄鱼卵分离蛋白的抗氧化能力，结合产物兼具分离蛋白营养价值及EGCG的抗氧化活性，可以作为一种新型的抗氧化剂应用于食品工业中。

发明内容

为了克服现有技术的缺点，本发明提供了一种大黄鱼卵分离蛋白-EGCG结合物的制备方法，本发明所述方法具有条件温和、生产效率高的特点。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种大黄鱼卵分离蛋白-EGCG结合物的制备方法，包括如下步骤：

S1、制备大黄鱼卵分离蛋白溶液：将大黄鱼卵分离蛋白溶解于去离子水中，制备成分离蛋白溶液；所述大黄鱼卵分离蛋白和去离子水的重量体积比为(0.1～0.2):50g/ml；申请号为201811034409.X，《大黄鱼卵中蛋白及脂质的同步提取及组成特性研究》的发明专利申请中记载一种大黄鱼卵分离蛋白的制备方法，本发明所述大黄鱼卵分离蛋白可以选用该发明申请所述的制备方法制备的大黄鱼卵分离蛋白；

S2、自由基诱导分离蛋白：向步骤S1所述分离蛋白溶液中加入其0.02～0.025倍体积的5M过氧化氢溶液和L-抗坏血酸，搅拌混匀得大黄鱼卵分离蛋白自由基诱导溶液；所述L-抗坏血酸和分离蛋白溶液的重量体积比为(0.25～0.3):50g/ml；

S3、加入表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)：向步骤S2所述大黄鱼卵分离蛋白自由基诱导溶液中加入表没食子儿茶素没食子酸酯，搅拌混匀，得大黄鱼卵分离蛋白与EGCG混合溶液；所述表没食子儿茶素没食子酸酯和大黄鱼卵分离蛋白自由基诱导溶液的重量体积比为(0.045～0.09):50g/ml；

S4、透析：使用1～3.5KDa的透析膜及去离子水对步骤S3所述大黄鱼卵分离蛋白与EGCG混合溶液进行透析，除去未结合的EGCG，得大黄鱼卵分离蛋白-EGCG结合物溶液；

S5、干燥：将步骤S4所述大黄鱼卵分离蛋白-EGCG结合物溶液进行真空冷冻干燥，得到大黄鱼卵分离蛋白-EGCG结合物。

优选方式下，步骤S2所述搅拌混匀具体为：25～30℃、300～400rpm搅拌2h。

优选方式下，步骤S3所述搅拌混匀具体为：25～30℃、300～400rpm搅拌20～24h。