[发明专利]提取家蚕核型多角体病毒基因组核酸的试剂盒和方法

权利要求书

1.提取家蚕核型多角体病毒基因组核酸的试剂盒，包括提取液、中和液、漂洗液和核酸溶解液，其中：

提取液包含如下配比的组分：10～100mM的Tris-HCl，1～250mM的EDTA，0.15～2.0M的NaCl，0.1～0.5M的Na₂CO₃，0.2～1wt％的SDS，0.1mg/mL的RnaseA；其中，Tris-HCl和EDTA的pH均为8.0；

中和液为浓度3M、pH5.2的NaAC溶液；

漂洗液为70％乙醇；

核酸溶解液的组分的配比为：10mM的Tris-HCl，10mM的EDTA，两者的pH均为8.0。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，提取液的组分配比为：10mM的Tris-HCl，10mM的EDTA，0.5M的NaCl，0.13M的Na₂CO₃，0.5wt％的SDS，0.1mg/ml的RnaseA。

3.提取家蚕核型多角体病毒基因组核酸的方法，使用上述权利要求1～2中任一项所述的试剂盒，该方法包括以下步骤：

1）将发病蚕在300目筛中磨烂，收集下滤液，加水进行离心，沉淀加水再次离心，所得沉淀加水混匀；

2）加水混匀后的沉淀中加入提取液，48～52℃孵育18～22min，加入中和液，提取液和中和液为沉淀混匀时所加水体积的0.8～1.2倍，离心，所得上清液加入0.3～0.5倍体积的无水乙醇，静置，离心后取沉淀，即可；

最后所得沉淀还经过漂洗液洗涤和溶于核酸溶解液保存的步骤；

漂洗液洗涤的过程为：将沉淀加入漂洗液中洗涤两次，每次洗涤后离心取沉淀；

溶于核酸溶解液保存的过程为：将两次洗涤后的沉淀加入核酸溶解液中溶解，于-20℃保存。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：在步骤2）中，静置的时间为8～12min。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

在步骤1）中，两次离心的条件均为转速1000rpm、时间10min；

在步骤2）中，离心的条件为转速12000rpm、时间15min；

在漂洗液洗涤的过程中，两次离心的条件均为转速12000rpm、时间3min。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：沉淀加入核酸溶解液前，先用枪头吸掉残余液体后静置2min。