[发明专利]牛支原体膜蛋白p59作为抗原蛋白的应用在审
| 申请号： | 201910785036.8 | 申请日： | 2019-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN110483626A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 张亮;蒋仁新;王基隆;张云飞;杨宏军;刘来兴;朱曼玲;解晓莉;程凯慧 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院奶牛研究中心 |
| 主分类号： | C07K14/30 | 分类号： | C07K14/30;C12N15/70;G01N33/569;G01N33/68;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 37221 济南圣达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 张晓鹏<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 250132 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 支原体 膜蛋白 重组蛋白 抗体 蛋白 疫苗 特异性结合作用 基因工程表达 牛支原体疫苗 病原 表面膜蛋白 支原体抗原 支原体生长 阳性血清 抗原性 可用 牛场 制备 商品化 检测 养殖 威胁 应用 发现 研究 | ||
1.膜蛋白p59作为牛支原体抗原蛋白的应用。
2.膜蛋白p59抗体作为牛支原体抑制剂的应用。
3.一种重组p59蛋白，其特征在于，所述重组p59蛋白具有NCBI蛋白数据库中编号为ADR25304.1所对应的氨基酸序列。
4.一种重组p59蛋白的外源性表达方法，其特征在于，所述表达方法包括以下步骤：构建含有p59的重组质粒，将重组质粒整合至大肠杆菌DH5α感受态细胞获取阳性重组质粒，将阳性重组质粒导入大肠杆菌BL21表达菌中获取重组p59蛋白。
5.如权利要求4所述重组p59蛋白的外源性表达方法，其特征在于，外源表达方法还包括p59基因扩增，通过上、下游引物组合通过PCR扩增目的基因；优选的，所述上游引物A1：
5’-CGCGGATCCATGGAACACAATTATG-3’，所述下游引物A2：
5′-ACGCTCGAGTTCATCGCCTTCT-3′。
6.如权利要求4所述重组p59蛋白的外源性表达方法，其特征在于，所述将阳性重组质粒导入大肠杆菌BL21表达菌中经IPTG诱导表达；优选的，所述IPTG终浓度0.4～0.6mmol/L时，35～39℃诱导2.5～4.5h
7.权利要求3所述重组蛋白p59在制备牛支原体疫苗中的应用。
8.一种牛支原体疫苗，其特征在于，所述疫苗包括权利要求3所述重组p59蛋白及免疫佐剂。
9.一种牛支原体检测方法，其特征在于，所述检测方法采用牛阳性血清抗体作为捕捉抗体；优选的，所述检测方法采用显色基团标记的牛阳性血清与p59蛋白的特异性结合对牛支原体蛋白进行检测。
10.一种牛支原体检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中包括显色基团标记的牛阳性血清或牛阳性血清及辣根过氧化物酶标记的牛阳性血清抗体。
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